瓜石汤对初老雌性大鼠卵巢储备功能影响的实验研究

论文摘要

目的：探索中药复方瓜石汤对初老雌性大鼠卵巢储备功能的影响及其作用机理,为改善卵巢储备功能下降、延缓卵巢衰老、增进绝经前期妇女身体健康、防治相关病症提供新的思路。方法：选4～6月龄雌性SD大鼠为正常对照组。10～12月龄雌性SD大鼠、阴道细胞学涂片显示动情周期延长者为初老大鼠模型来模拟人女性卵巢储备功能下降阶段；将初老模型大鼠随机分为5组：模型组、瓜石汤高剂量组、瓜石汤中剂量组、六味地黄丸组和金匮肾气丸组。全部实验大鼠灌药4周选择动情间期称重,断头取血,离心取上清液,采用放射免疫分析法测定血清中E2、P和IGF-1水平,采用酶联免疫吸附法检测血清FSH和VEGF;迅速剖腹取出卵巢、子宫、脾脏、肾上腺,剔除周围组织,滤纸稍拭后称重,计算脏器指数；子宫、卵巢标本均用4%多聚甲醛溶液固定,常规脱水,浸蜡包埋,切片4μm,HE染色,普通光学显微镜观察子宫、卵巢组织形态学变化,用免疫组织化学法检测卵巢中INHB、ER、FSHR、Bcl-2和Caspase-3的表达情况。结果：在血清检测方面：与正常对照组比较,模型组大鼠的血清E2、P水平明显降低（P<0.05）；经瓜石汤治疗后,初老模型大鼠的血清E2、P水平显著提高,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）；六味地黄丸组和金匮肾气丸组有升高初老大鼠血清E2、P水平的趋势,但与模型组比较差异无统计学意义（P>0.05）；各组大鼠血清FSH比较差异均无统计学意义（P>0.05）。瓜石汤、六味地黄丸和金匮肾气丸均可不同程度增加初老模型大鼠的子宫、卵巢、脾脏、肾上腺的指数,能显著升高初老模型大鼠血清VEGF和IGF-1的水平,与模型组比较均有显著性差异（P<0.05）。大鼠卵巢组织形态学的改变：正常对照组大鼠卵巢形态结构正常,卵泡生长活跃,可见各期卵泡及黄体组织；模型组大鼠卵巢可见各级卵泡但数量明显减少,成熟卵泡及黄体组织偏少,血管管径变细,与正常对照组比较有显著性差异（P<0.05）；瓜石汤中剂量组、瓜石汤高剂量组、六味地黄丸组和金匮肾气丸组可见各级卵泡和黄体组织,血管基本正常,与模型组比较其差异均有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较,各用药组大鼠的卵巢血管腔面积增加,血管壁厚度面积比降低,提示各用药组初老大鼠卵巢血供均有所增加。在Bcl-2、Caspase-3蛋白表达方面：模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达较正常对照组明显下降,其Caspase-3蛋白的表达较正常组明显升高,两组间比较均有极显著性差异（P<0.01）；六味地黄丸组、金匮肾气丸组和瓜石汤高剂量组均可以升高初老模型大鼠卵巢Bcl-2、降低Caspase-3蛋白的表达,与模型组比较均有显著性差异（P<0.05）。在INHB蛋白表达方面：模型组大鼠卵巢INHB的表达较正常对照组明显降低,两组间比较有极显著性差异（P<0.01）；六味地黄丸组和瓜石汤高剂量组均可以明显升高初老大鼠卵巢INHB蛋白的表达,与模型组比较均有显著性差异（P<0.05）。瓜石汤和补肾中药还可以上调初老模型大鼠卵巢ERp和FSHR的表达,与模型组比较均有显著性差异（P<0.05）,但均不能达到正常对照组水平。结论：①瓜石汤和补肾中药都能升高初老模型大鼠血清E2、P水平,可能存在改善初老大鼠卵巢生殖内分泌功能的作用。②细胞凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3及卵巢局部调节因子INHB与卵巢储备功能密切相关,瓜石汤和补肾中药可以上调初老大鼠Bcl-2、INHB,下调Caspase-3蛋白的表达,从而抑制卵巢颗粒细胞凋亡、减少卵泡闭锁。③瓜石汤和补肾中药还具有增加卵巢局部血供,改善卵巢局部微循环,调节初老卵巢功能的作用。以上这些都可能是瓜石汤和补肾中药改善卵巢储备功能下降、延缓初老模型大鼠卵巢生殖机能衰老的作用机制。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 中英文名词对照
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药品
• 1.3 实验试剂
• 1.4 实验仪器
• 1.5 实验方法
• 1.5.1 筛选初老大鼠模型
• 1.5.2 动物分组
• 1.5.3 给药剂量的确定及灌胃
• 1.6 检测方法
• 1.7 数据处理及统计方法
• 2 实验结果
• 2.1 各组大鼠用药前后体重变化
• 2.2 各组大鼠卵巢、子宫、脾脏、肾上腺的脏器指数
• 2.3 各组大鼠血清生殖激素检测结果
• 2.4 各组大鼠血清IGF-1、VEGF检测结果
• 2.5 各组大鼠卵巢、子宫组织形态学观察
• 2.5.1 各组大鼠卵巢中卵泡数和黄体数
• 2.5.2 各组大鼠卵巢直径
• 2.5.3 各组大鼠卵巢门血管腔面积比
• 2.5.4 各组大鼠卵巢门血管壁厚度面积比
• 2.5.5 各组大鼠子宫病理组织形态学变化
• 2.6 免疫组织化学检测结果
• 2.6.1 各组大鼠卵巢中FSHR的表达
• 2.6.2 各组大鼠卵巢中抑制素B的表达
• 2.6.3 各组大鼠卵巢中Caspase-3的表达
• 2.6.4 各组大鼠卵巢中Bcl-2的表达
• 2.6.5 各组大鼠卵巢中ER的表达
• 3 讨论
• 3.1 本课题的立项依据与思路
• 3.1.1 卵巢储备功能下降的中医学认识
• 3.1.2 从阳明、痰浊瘀血干预卵巢储备功能下降
• 3.2 关于模型的选择及评价
• 3.3 动物分组及阳性药物的选择
• 3.4 检测指标的意义分析
• 3.4.1 生殖内分泌激素
• 3.4.2 细胞生长因子
• 3.4.3 细胞凋亡因子
• 3.4.4 抑制素B（INHB）
• 3.4.5 雌激素受体与促卵泡激素受体
• 3.4.6 脏器指数及卵巢、子宫组织形态学变化
• 3.5 实验结果分析
• 3.5.1 卵巢衰老相关因素
• 3.5.2 卵巢储备功能下降的预测指标
• 3.6 瓜石汤影响初老大鼠卵巢储备功能下降的作用机制
• 4 结论
• 4.1 瓜石汤可以影响初老大鼠的生殖内分泌功能
• 4.2 瓜石汤可以影响初老大鼠的卵巢颗粒细胞凋亡
• 4.3 瓜石汤可以改善初老大鼠卵巢局部血供
• 4.4 瓜石汤可以改善初老大鼠下降的卵巢功能、延缓卵巢衰老
• 5 问题与展望
• 5.1 生殖轴研究不完善
• 5.2 中药治疗DOS相关病症存在多方面调节机制
• 5.3 大鼠是否存在下丘脑-垂体-卵巢轴反馈机制目前尚无定论
• 致谢
• 参考文献
• 附录一 卵巢、子宫病理组织学及免疫组化图片
• 附录一（综述） 中医药延缓卵巢衰老机制的研究进展
• 1 调节下丘脑-垂体-卵巢轴
• 2 促进卵泡发育和排卵
• 3 调节相关细胞因子及受体水平
• 4 影响细胞凋亡
• 5 调节生殖内分泌激素
• 6 修复卵巢自身免疫损伤
• 7 影响自由基代谢
• 8 改善微循环
• 参考文献
• 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果