导读:本文包含了神经组织定向干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:神经组织定向干细胞,聋,噪声性,毛细胞
神经组织定向干细胞论文文献综述
张莹莹,梁耕田,刘莉,卢岭,刘金炎[1]（2015）在《骨髓神经组织定向干细胞移植修复噪声性聋豚鼠耳蜗毛细胞的实验研究》一文中研究指出目的:观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对噪声性聋听神经损伤豚鼠耳蜗毛细胞的修复作用。方法:将50只豚鼠按随机数字表法分为对照组(10只)、噪声暴露组(10只)和移植组(30只)。移植组及噪声暴露组豚鼠均在白噪声下暴露1周,暴露结束后将转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的骨髓NTCSCs移植至豚鼠左耳耳蜗蜗轴处(右耳作为自身对照,注射相同体积的0.1%PBS溶液),分别测试噪声暴露前1d和暴露后1、2及4周后的ABR阈值,并通过扫描电镜观察噪声暴露后4周豚鼠耳蜗毛细胞的形态学变化情况。结果:成功分离培养出骨髓NTCSCs,随着移植时间的延长,转染EGFP的骨髓NTCSCs球团和细胞聚集现象,逐渐接近corti器和基膜;耳蜗切片中Nestin(+)细胞的数量明显增多(P<0.05),而MyosinⅦa(+)细胞的数量无明显变化。与噪声暴露前相比,移植组豚鼠ABR阈移小于噪声暴露组(均P<0.05)。扫描电镜显示,噪声暴露组豚鼠耳蜗内、外毛细胞均出现听毛紊乱、融合及缺失;而移植组耳蜗病变较轻,听毛仅有轻微倒伏、融合现象。结论:随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,豚鼠ABR阈值得到明显改善。骨髓NTCSCs移植后可逐渐分化成耳蜗螺旋神经节神经元,进而起到改善噪声性聋豚鼠听力的作用。(本文来源于《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》期刊2015年17期）
于振海[2]（2014）在《骨髓神经组织定向干细胞源性感觉神经元移植修复周围神经感觉缺损》一文中研究指出临床患者常见的腰部及下肢放射性痛多由腰椎间盘突出症、腰椎管狭窄、腰骶椎不稳定等原因造成的脊神经根受压所致，严重者可以造成患肢的运动功能丧失。椎板开窗、髓核摘除、神经根减压等手术治疗，虽然可以使患者的运动功能及疼痛症状得到缓解，但患肢的麻木等感觉功能障碍却难以恢复，这成为长期困扰临床医生的棘手问题。神经损伤后感觉功能受损的主要表现是患者的痛觉、温度觉障碍以及继发性的感觉性共济运动失调。此外，感觉神经元构成神经系统反射弧的传入路径，因此还可能造成各种生理性的反射功能丧失等严重后果。如阴部神经的感觉功能缺损，可造成肛门反射异常而引起大便失禁；盆内脏神经的感觉功能缺损，可造成病人膀胱反射消失而引起尿潴留等一系列临床症状。可见，神经损伤后，修复患者的感觉功能，是提高神经修复效果、改善患者生活质量，必须重视的问题。通过再生医学移植神经干细胞修复神经损伤是公认的有效方法和手段，但目前注意点主要集中在损伤神经的运动功能恢复方面，对感觉功能的恢复缺乏重视。本课题拟通过成体干细胞源性感觉神经元移植，探讨修复感觉缺损的可能性及机制。通过再生医学移植神经干细胞的方法修复周围感觉神经缺损，首先必须解决移植细胞的种类、来源，和诱导分化为感觉神经元细胞的问题。骨髓神经组织定向干细胞（neural tissue committed stem cells，NTCSCs），是骨髓间充质干细胞的一种亚型，或组分，可以自然分化为神经元细胞。NTCSCs可来源于自体、无伦理学争议、避免了免疫排斥反应，并且取材容易，活性好，易于诱导分化，应是较为理想的移植用种子细胞来源。我们实验室前期成功分离、培养了NTCSCs，并诱导分化为神经元样细胞，用于修复周围神经缺损，取得了初步研究成果，但，由于该干细胞存在一定争议，应用研究较少涉及。Kondo T等通过Forskolin（腺苷酸环化酶激活剂）和成纤维细胞生长因子-2（fibroblast growth factor-2，FGF2）预诱导，再经音猥因子(sonic hedgehog，SHH)和维甲酸（retinoic acid，RA）的联合诱导，可以将C57小鼠的骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）诱导分化为特异性表达VGluT1（Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体）、calretinin（钙结合蛋白）、P2X3（ATP调控的一种离子通道受体）等谷氨酸能感觉神经元特异性标志蛋白的细胞，且可以在脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）存在的微环境中长期存活。这为我们通过骨髓NTCSCs获得大量稳定的可移植用的感觉神经元提供了借鉴依据。通过移植感觉神经元的方法修复周围神经感觉缺损，还需要找到适宜的周围神经感觉缺损的动物模型。脊神经节内聚集着假单极感觉性神经元，这种感觉神经元负责接收来自躯体和四肢的感觉信息，并进一步传递至中枢神经。背根神经节神经元是一种终末分化神经细胞，一旦死亡，不能再生，从而造成肢体的感觉功能出现异常。Helgren等采用腹腔注射过量吡哆醇的方法导致神经纤维轴索变性及背根神经节神经元的坏死。后续研究证明，通过注射过量吡哆醇制作感觉神经病动物模型的方法简单、操作性强、重复性好，是目前神经科学领域研究感觉神经病的常用模型。综上所述，本课题拟在成功制备背根神经节病变大鼠动物模型基础上，研究同种异体骨髓NTCSCs源性感觉神经元样细胞移植，修复感觉神经缺损的效果与机制，探讨成体干细胞源性感觉神经元移植，修复感觉神经缺损的可行性，为临床治疗周围神经感觉缺损提供理论和实验依据。第一部分骨髓NTCSCs源性感觉神经元的分离、培养、诱导分化及鉴定研究目的：获取移植应用所需的骨髓NTCSCs源性感觉神经元细胞。材料和方法：从成年SD大鼠骨髓组织中分离获得单个核细胞，采用先贴壁培养筛选、后无血清神经干细胞培养液悬浮培养的方式，分离、扩增出单克隆生长的NTCSCs；对得到的NTCSCs进行鉴定；扩增得到的NTCSCs采用SHH和RA等联合诱导的方法使其向感觉神经元方向分化；对得到的骨髓NTCSCs源性感觉神经元进行鉴定。结果：SD大鼠骨髓组织中的单个核细胞采用单细胞克隆、无血清悬浮培养得到大量的神经球；神经球细胞表达神经干细胞特异蛋白Nestin和组织定向干细胞特异蛋白CXCR4，同时具有MSCs表型特征：CD29（97.81%）、CD44（91.31%）、CD90（93.85%）、CD105（95.08%）、CD34（3.78%）、CD45（1.59%）；超微结构显示多个核仁、丰富的线粒体、常染色质较多等干细胞特征。神经球细胞经SHH和RA联合诱导后表现神经元样细胞外形特征，并且表达NeuN、MAP-2、β-tublinⅢ、GluR-4等蛋白；Gria4、Gria3、Calb2、Pou4f1、Tau、NeuN、MAP-2、Tubulin Ⅲ、NF、GFAP、Neurogenin2等基因表达上调，Nestin、Ret、GATA3等基因表达下调；Tau、MAP-2、NF、NSE、NeuN、Gria4等蛋白表达量增加，Nestin蛋白表达降低。结论：骨髓组织中存在NTCSCs，可以分离，并能通过细胞球悬浮培养的方法得到大量扩增；NTCSCs在SHH和RA的联合诱导作用下可以分化为具有谷氨酸能特征的感觉神经元样细胞。第二部分周围神经感觉缺损动物模型的建立研究目的：建立周围神经感觉缺损动物模型。材料和方法：成年雌性SD大鼠，体重180-220g，采用早晚两次，连续8天，腹腔注射800mg/kg/d吡哆醇盐酸盐，进行周围神经感觉缺损动物模型的制作。通过动物功能行为学、神经电生理学、受损背根神经节及坐骨神经的组织形态学观察与计量等实验方法，对得到的动物模型进行综合性评价。结果：造模后动物步态蹒跚、平衡及稳定性较差；足底温度觉和痛觉敏感度降低；坐骨神经感觉潜伏期延长，传导速度降低；背根神经节的神经元萎缩、变性、坏死，神经纤维轴索变性，排列疏松紊乱，伴有髓鞘塌陷、扭曲等。结论：通过腹腔注射过量吡哆醇的方法可以制作周围神经感觉缺损动物模型。第叁部分骨髓NTCSCs源性感觉神经元移植修复大鼠周围神经感觉缺损的作用与机制研究目的：探讨骨髓NTCSCs源性感觉神经元样细胞移植修复SD大鼠周围神经感觉缺损的作用与机制。材料和方法：采用显微注射的方法，将CM-Dil标记的骨髓NTCSCs源性感觉神经元细胞，移植进入吡哆醇诱导的感觉缺损模型动物的L4、L5背根神经节内。分别于移植术后第2周、4周、8周、12周对模型动物进行行为学观察；感觉功能评测；坐骨神经电生理学检测；坐骨神经及背根神经节形态学观察及计量学分析；荧光金（FG）逆行示踪等实验方法与手段，观测移植的感觉神经元对模型动物感觉功能的修复情况。结果：移植骨髓NTCSCs源性感觉神经元后，模型动物的一般姿势、动作步态随时间的延长出现明显好转的迹象；足底温度觉和痛觉敏感度逐渐恢复；坐骨神经有髓神经纤维计数明显增加，感觉潜伏期缩短、感觉神经传导速度增加，且与时间线性相关；免疫荧光染色CM-Dil标记的骨髓NTCSCs源性感觉神经元在DRG内迁移、定植，并表达NeuN和GluR-4蛋白；DRG内检测到FG标记的神经元细胞数量显着增多。结论：移植骨髓NTCSCs源性感觉神经元可以有效修复周围神经感觉缺损。(本文来源于《第二军医大学》期刊2014-05-01）
张莹莹,梁耕田,刘莉,卢岭,刘金炎[3]（2013）在《骨髓神经组织定向干细胞移植治疗大鼠听神经损伤的实验研究》一文中研究指出目的观察骨髓神经组织定向干细胞(nerve tissue committed stem cells,NTCSCs)移植治疗大鼠听神经损伤的作用。方法将60只SD大鼠按数字随机法分为5组,每组各12只,A组为对照组,在平静饲养环境下培养,另外4组(B、C、D、E组)构建感音神经性耳聋动物模型。B组大鼠断头后取出听泡组织行HE常规染色,详细观察耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)损伤和内耳毛细胞存活情况,确认造模成功。将绿色荧光蛋白(green fluore scent protein,EGFP)基因表达阳性的骨髓NTCSCs注射至C、D、E 3组大鼠左耳耳蜗蜗轴处,SD大鼠右耳及A组作为对照;采用同一方法注射相同体积的0.1%PBS溶液。HE染色观察耳蜗中轴切片,在荧光显微镜下观察转染EGFP基因的NTCSCS存活、分布部位及表达情况。结果 C组(移植后1周)内耳耳蜗切片上发现转染绿色荧光蛋白(green fluore scent protein,EGFP)基因的骨髓NTCSCs分散在鼓阶的腔隙内,D组(移植后2周)发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs位置靠近基底膜和柯蒂氏器部位,E组(移植后4周)发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs球团和多个在一起的细胞聚集,并且位置靠近基底膜和柯蒂氏器部位,呈现良好的分布,类似有向基底膜和柯蒂氏器迁移行为。随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,Nestin(+)细胞数量明显增多(P<0.05),而MyosinⅦa(+)细胞数量无明显变化(P>0.05)。结论骨髓NTCSCs移植大鼠耳蜗后可在一定程度上修复损伤听神经。(本文来源于《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》期刊2013年06期）
张莹莹,梁耕田,刘莉,卢岭,刘金炎[4]（2013）在《骨髓神经组织定向干细胞移植对听神经损伤大鼠听力的修复作用》一文中研究指出目的:探讨骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对听神经损伤大鼠听力的修复作用。方法:将转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的骨髓NTCSCs移植至螺旋神经元特异性损伤模型大鼠左耳耳蜗蜗轴处(右耳作为自身对照,注射相同体积50μl PBS溶液),同时设实验对照组(注射相同体积50μl PBS溶液),注射后1周、2周、1个月时检测听性脑干反应(ABR)阈值和畸变产物耳声发射(DPOAE)幅值等变化情况。结果:随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,ABR阈值得到明显改善(P<0.05),DPOAE幅值明显上升(P<0.05)。结论:骨髓NTCSCs移植可明显改善听神经损伤大鼠的听力。(本文来源于《现代医学》期刊2013年12期）
李琳[5]（2013）在《骨髓神经组织定向干细胞研究现状》一文中研究指出本文从骨髓神经组织干细胞的分离培养、生物学特性、在不同年龄阶段含量不一及面临的问题进行简要的阐述。(本文来源于《现代企业教育》期刊2013年20期）
张莹莹,梁耕田,刘莉,卢岭,刘金炎[6]（2013）在《骨髓神经组织定向干细胞移植修复听神经损伤模型大鼠的实验研究》一文中研究指出目的观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对听神经损伤大鼠的修复作用。方法将转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的骨髓NTCSCs移植至螺旋神经元特异性损伤模型大鼠左耳耳蜗蜗轴处(右耳作为自身对照,注射相同体积PBS溶液),同时设对照组(A组)、实验组(B~E组),所有组注射相同体积PBS溶液,HE染色观察耳蜗中轴切片,在荧光显微镜下观察感染EGFP的NTCSCs存活、分布部位及表达情况,注射后1周、2周、1个月时检测ABR阈值和DPOAE幅值等变化情况。结果 C组内耳耳蜗切片上发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs分散在鼓阶的腔隙内,D组发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs位置靠近基底膜和柯蒂氏器部位,E组发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs球团和两叁个在一起的细胞聚集,并且位置靠近基底膜和柯蒂氏器部位,呈现良好的分布,类似有向基底膜和柯蒂氏器迁移行为;随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,Nestin(+)细胞数量明显增多(P<0.05),而MyosinⅦa(+)细胞数量无明显变化(P>0.05);随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,ABR阈值得到明显改善(P<0.05),DPOAE幅值明显上升(P<0.05)。结论骨髓NTCSCs移植大鼠耳蜗后可逐渐分化成为螺旋神经节神经元(SGNs),进而起到改善听神经损伤大鼠听力的作用。(本文来源于《山东大学耳鼻喉眼学报》期刊2013年05期）
武士兴,于振海,蔺海燕,刘芳,张志英[7]（2013）在《骨髓神经组织定向干细胞诱导分化为运动神经元的研究》一文中研究指出本研究拟探索一种合理有效的运动神经元诱导方案,为组织工程化神经的构建提供易于获取、数量丰富的种子细胞,从而为周围神经损伤的治疗提供一种有效的、更有针对性的治疗方法。在本研究中采用两步法诱导骨髓来源神经组织定向干细胞(neural tissue-committedstem cells,NTCSCs)分化为运动神经元:第一步,采用先贴壁、后悬浮的方法,分离培养大鼠骨髓神经组织定向干细胞;第二步,采用小分子化合物如RA、Shh、Br、RG等诱导骨髓神经组织定向干细胞向运动神经元分化,并对(本文来源于《中国解剖学会2013年年会论文文摘汇编》期刊2013-08-02）
李琳,张兴秀,王健,姜容,郑敏[8]（2012）在《脑缺血后移植骨髓神经组织定向干细胞的分布与分化》一文中研究指出目的观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)经静脉移植后在脑缺血大鼠脑内的分布和分化情况。方法采用DMEM/F12(1:1)无血清神经干细胞条件培养基,从SD大鼠骨髓中分离、培养NTCSCs,应用免疫组化法对所获细胞及其分化情况进行鉴定,RT-PCR检测Nestin、CXCR4、CD31、βⅢ-tubulin及GFAP mRNA的表达水平。采用改良Zea-Longa线栓法制作SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,造模成功24h后经尾静脉注射1ml DAPI标记的NTCSCs。移植后第1、3、5、7d处死大鼠,制备脑组织冰冻切片,荧光显微镜观察NTCSCs在脑组织的分布,激光共聚焦显微镜观察NTCSCs的分化情况。结果分离培养获得的NTCSCs在神经干细胞培养条件下形成神经球,并表达神经干细胞标志巢蛋白Nestin及SDF-1受体CXCR4,可分化成βⅢ-tubulin、GFAP阳性细胞;RT-PCR检测结果显示NTCSCs表达Nestin、CXCR4、CD31、βⅢ-tubulin、GFAP mRNA。静脉移植后NTCSCs能够进入大鼠脑内,移植后第3天观察到DAPI标记的NTCSCs主要分布在缺血损伤部位,第7天时有少量NTCSCs分化为GFAP阳性细胞。结论分离培养的NTCSCs具有神经干细胞特性,移植后可能进入缺血脑组织,部分细胞表达GFAP。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2012年11期）
李琳[9]（2012）在《大鼠骨髓神经组织定向干细胞的分离培养及其移植到大鼠脑缺血模型的初步探索》一文中研究指出目的：培养骨髓神经组织定向干细胞(neural tissue committed stemcells, NTCSCs)，观察NTCSCs经静脉移植后在脑缺血大鼠脑内的分布和分化情况。方法：采用DMEM/F12(1:1)无血清神经干细胞条件培养基，从大鼠骨髓中分离、培养克隆生长的神经组织定向干细胞(neural tissuecommitted stem cells, NTCSCs)，应用免疫细胞化学对NTCSCs及其分化进行鉴定，利用RT-PCR检测Nestin、CXCR4、CD31、β-Ⅲ-tubulin、GFAP mRNA表达。采用改良Zea—Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，造模成功24h后经尾静脉注射1mlDAPI标记的NTCSCs。移植后第1、3、5、7d处死大鼠，制备脑组织冰冻切片，荧光显微镜下观察NTCSCs在脑组织的分布，激光共聚焦显微镜下观察NTCSCs的分化。结果：分离培养获得的NTCSCs在神经干细胞培养条件下能形成神经球，并表达神经干细胞标志巢蛋白Nestin及SDF-1受体CXCR4，能分化成β-Ⅲ-tubulin、GFAP阳性细胞；RT-PCR检测结果显示NTCSCs表达Nestin、CXCR4、CD31、β-Ⅲ-tubulin、GFAP mRNA；静脉移植NTCSCs能够进入大鼠脑内，移植后3天观察到DAPI标记的NTCSCs主要分布在缺血损伤部位，7天时有少量NTCSCs分化为GFAP阳性细胞结论：分离培养的NTCSCs具有神经干细胞特性，移植后NTCSCs能进入缺血脑组织，部分细胞表达GFAP。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2012-05-01）
任丛莉,张志英,刘芳,张传森,李亮[10]（2009）在《骨髓神经组织定向干细胞性组织工程化神经的构建》一文中研究指出目的:为临床周围神经损伤的移植治疗提供生物化的神经移植替代物。方法:将骨髓神经组织定向干细胞(NTC-SCs)种植于犬坐骨神经脱细胞神经支架,构建组织工程化神经,桥接缺损的大鼠坐骨神经,检测所构建生物化组织工程神经中骨髓NTCSCs的增殖、分化及神经性基因表达,观察该神经移植到体内后的细胞增殖、分化及对神经缺损功能的修复。结果:由骨髓NTCSCs和异种脱细胞神经支架构建的生物化组织工程神经物理性状相似于神经移植体,骨髓NTCSCs在支架上增殖、迁移,并表达神经性基因及蛋白。该组织工程神经植入体内后,骨髓NTCSCs分化为少量神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞及大量S-100阳性细胞,并可修复缺损的坐骨神经功能。结论:骨髓NTCSCs和异种脱细胞神经支架构建的生物化组织工程神经相似于神经移植体,可应用于周围神经损伤修复中。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2009年01期）
神经组织定向干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
临床患者常见的腰部及下肢放射性痛多由腰椎间盘突出症、腰椎管狭窄、腰骶椎不稳定等原因造成的脊神经根受压所致，严重者可以造成患肢的运动功能丧失。椎板开窗、髓核摘除、神经根减压等手术治疗，虽然可以使患者的运动功能及疼痛症状得到缓解，但患肢的麻木等感觉功能障碍却难以恢复，这成为长期困扰临床医生的棘手问题。神经损伤后感觉功能受损的主要表现是患者的痛觉、温度觉障碍以及继发性的感觉性共济运动失调。此外，感觉神经元构成神经系统反射弧的传入路径，因此还可能造成各种生理性的反射功能丧失等严重后果。如阴部神经的感觉功能缺损，可造成肛门反射异常而引起大便失禁；盆内脏神经的感觉功能缺损，可造成病人膀胱反射消失而引起尿潴留等一系列临床症状。可见，神经损伤后，修复患者的感觉功能，是提高神经修复效果、改善患者生活质量，必须重视的问题。通过再生医学移植神经干细胞修复神经损伤是公认的有效方法和手段，但目前注意点主要集中在损伤神经的运动功能恢复方面，对感觉功能的恢复缺乏重视。本课题拟通过成体干细胞源性感觉神经元移植，探讨修复感觉缺损的可能性及机制。通过再生医学移植神经干细胞的方法修复周围感觉神经缺损，首先必须解决移植细胞的种类、来源，和诱导分化为感觉神经元细胞的问题。骨髓神经组织定向干细胞（neural tissue committed stem cells，NTCSCs），是骨髓间充质干细胞的一种亚型，或组分，可以自然分化为神经元细胞。NTCSCs可来源于自体、无伦理学争议、避免了免疫排斥反应，并且取材容易，活性好，易于诱导分化，应是较为理想的移植用种子细胞来源。我们实验室前期成功分离、培养了NTCSCs，并诱导分化为神经元样细胞，用于修复周围神经缺损，取得了初步研究成果，但，由于该干细胞存在一定争议，应用研究较少涉及。Kondo T等通过Forskolin（腺苷酸环化酶激活剂）和成纤维细胞生长因子-2（fibroblast growth factor-2，FGF2）预诱导，再经音猥因子(sonic hedgehog，SHH)和维甲酸（retinoic acid，RA）的联合诱导，可以将C57小鼠的骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）诱导分化为特异性表达VGluT1（Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体）、calretinin（钙结合蛋白）、P2X3（ATP调控的一种离子通道受体）等谷氨酸能感觉神经元特异性标志蛋白的细胞，且可以在脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）存在的微环境中长期存活。这为我们通过骨髓NTCSCs获得大量稳定的可移植用的感觉神经元提供了借鉴依据。通过移植感觉神经元的方法修复周围神经感觉缺损，还需要找到适宜的周围神经感觉缺损的动物模型。脊神经节内聚集着假单极感觉性神经元，这种感觉神经元负责接收来自躯体和四肢的感觉信息，并进一步传递至中枢神经。背根神经节神经元是一种终末分化神经细胞，一旦死亡，不能再生，从而造成肢体的感觉功能出现异常。Helgren等采用腹腔注射过量吡哆醇的方法导致神经纤维轴索变性及背根神经节神经元的坏死。后续研究证明，通过注射过量吡哆醇制作感觉神经病动物模型的方法简单、操作性强、重复性好，是目前神经科学领域研究感觉神经病的常用模型。综上所述，本课题拟在成功制备背根神经节病变大鼠动物模型基础上，研究同种异体骨髓NTCSCs源性感觉神经元样细胞移植，修复感觉神经缺损的效果与机制，探讨成体干细胞源性感觉神经元移植，修复感觉神经缺损的可行性，为临床治疗周围神经感觉缺损提供理论和实验依据。第一部分骨髓NTCSCs源性感觉神经元的分离、培养、诱导分化及鉴定研究目的：获取移植应用所需的骨髓NTCSCs源性感觉神经元细胞。材料和方法：从成年SD大鼠骨髓组织中分离获得单个核细胞，采用先贴壁培养筛选、后无血清神经干细胞培养液悬浮培养的方式，分离、扩增出单克隆生长的NTCSCs；对得到的NTCSCs进行鉴定；扩增得到的NTCSCs采用SHH和RA等联合诱导的方法使其向感觉神经元方向分化；对得到的骨髓NTCSCs源性感觉神经元进行鉴定。结果：SD大鼠骨髓组织中的单个核细胞采用单细胞克隆、无血清悬浮培养得到大量的神经球；神经球细胞表达神经干细胞特异蛋白Nestin和组织定向干细胞特异蛋白CXCR4，同时具有MSCs表型特征：CD29（97.81%）、CD44（91.31%）、CD90（93.85%）、CD105（95.08%）、CD34（3.78%）、CD45（1.59%）；超微结构显示多个核仁、丰富的线粒体、常染色质较多等干细胞特征。神经球细胞经SHH和RA联合诱导后表现神经元样细胞外形特征，并且表达NeuN、MAP-2、β-tublinⅢ、GluR-4等蛋白；Gria4、Gria3、Calb2、Pou4f1、Tau、NeuN、MAP-2、Tubulin Ⅲ、NF、GFAP、Neurogenin2等基因表达上调，Nestin、Ret、GATA3等基因表达下调；Tau、MAP-2、NF、NSE、NeuN、Gria4等蛋白表达量增加，Nestin蛋白表达降低。结论：骨髓组织中存在NTCSCs，可以分离，并能通过细胞球悬浮培养的方法得到大量扩增；NTCSCs在SHH和RA的联合诱导作用下可以分化为具有谷氨酸能特征的感觉神经元样细胞。第二部分周围神经感觉缺损动物模型的建立研究目的：建立周围神经感觉缺损动物模型。材料和方法：成年雌性SD大鼠，体重180-220g，采用早晚两次，连续8天，腹腔注射800mg/kg/d吡哆醇盐酸盐，进行周围神经感觉缺损动物模型的制作。通过动物功能行为学、神经电生理学、受损背根神经节及坐骨神经的组织形态学观察与计量等实验方法，对得到的动物模型进行综合性评价。结果：造模后动物步态蹒跚、平衡及稳定性较差；足底温度觉和痛觉敏感度降低；坐骨神经感觉潜伏期延长，传导速度降低；背根神经节的神经元萎缩、变性、坏死，神经纤维轴索变性，排列疏松紊乱，伴有髓鞘塌陷、扭曲等。结论：通过腹腔注射过量吡哆醇的方法可以制作周围神经感觉缺损动物模型。第叁部分骨髓NTCSCs源性感觉神经元移植修复大鼠周围神经感觉缺损的作用与机制研究目的：探讨骨髓NTCSCs源性感觉神经元样细胞移植修复SD大鼠周围神经感觉缺损的作用与机制。材料和方法：采用显微注射的方法，将CM-Dil标记的骨髓NTCSCs源性感觉神经元细胞，移植进入吡哆醇诱导的感觉缺损模型动物的L4、L5背根神经节内。分别于移植术后第2周、4周、8周、12周对模型动物进行行为学观察；感觉功能评测；坐骨神经电生理学检测；坐骨神经及背根神经节形态学观察及计量学分析；荧光金（FG）逆行示踪等实验方法与手段，观测移植的感觉神经元对模型动物感觉功能的修复情况。结果：移植骨髓NTCSCs源性感觉神经元后，模型动物的一般姿势、动作步态随时间的延长出现明显好转的迹象；足底温度觉和痛觉敏感度逐渐恢复；坐骨神经有髓神经纤维计数明显增加，感觉潜伏期缩短、感觉神经传导速度增加，且与时间线性相关；免疫荧光染色CM-Dil标记的骨髓NTCSCs源性感觉神经元在DRG内迁移、定植，并表达NeuN和GluR-4蛋白；DRG内检测到FG标记的神经元细胞数量显着增多。结论：移植骨髓NTCSCs源性感觉神经元可以有效修复周围神经感觉缺损。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
神经组织定向干细胞论文参考文献
[1].张莹莹,梁耕田,刘莉,卢岭,刘金炎.骨髓神经组织定向干细胞移植修复噪声性聋豚鼠耳蜗毛细胞的实验研究[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志.2015
[2].于振海.骨髓神经组织定向干细胞源性感觉神经元移植修复周围神经感觉缺损[D].第二军医大学.2014
[3].张莹莹,梁耕田,刘莉,卢岭,刘金炎.骨髓神经组织定向干细胞移植治疗大鼠听神经损伤的实验研究[J].中国耳鼻咽喉颅底外科杂志.2013
[4].张莹莹,梁耕田,刘莉,卢岭,刘金炎.骨髓神经组织定向干细胞移植对听神经损伤大鼠听力的修复作用[J].现代医学.2013
[5].李琳.骨髓神经组织定向干细胞研究现状[J].现代企业教育.2013
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