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核CaM Ⅰ/CaMKⅡ-CaMKⅣ信号通路在大鼠肥厚心肌中的意义及对β-MHC与c-fos基因转录调控作用的研究

2020-11-23阅读(993)

核CaM Ⅰ/CaMKⅡ-CaMKⅣ信号通路在大鼠肥厚心肌中的意义及对β-MHC与c-fos基因转录调控作用的研究

论文摘要

心肌肥厚是心肌对多种刺激的适应性反应,但长期的心肌肥厚公认是发生多种心血管并发症的独立危险因素。心肌细胞钙稳态失衡是心肌肥厚的重要机制之一,近年研究提示:心肌细胞核存在相对独立的钙调节系统,心肌细胞核钙感受蛋白改变并引起靶基因异常转录可能是心肌肥厚的机制之一。本课题首先制备大鼠腹主动脉缩窄心肌肥厚模型,提纯完整且具有活性的心肌细胞核。观察肥厚心肌的细胞核和细胞浆CaMⅠ、CaMKII、CaMKIV及CREB、pCREB的蛋白变化,CaMKII、CaMKIV的活性变化。检测肥厚心肌中α-MHC、β-MHC、c-fos mRNA的变化,并观察拮抗心肌细胞核的外核膜Ca++-ATP酶,抑制细胞核对钙的主动摄取;拮抗内核膜RyR、IP3受体,抑制心肌细胞核膜钙库中的钙向核内释放;使用CaMⅠ的拮抗剂、CaMⅠ调节酶拮抗剂、CaMKII拮抗剂,在不同位点抑制核CaMⅠ/CaMKII-CaMKIV的信号传导后β-MHC、c-fos基因在转录水平的变化。通过探讨核CaMⅠ/CaMKII-CaMKIV信号通路在肥厚心肌中的变化及对β-MHC、c-fos基因转录调控的作用,进一步阐明心肌肥厚的发生机制。方法:1.健康雄性SD大鼠150只,随机分为手术组和对照组,采用腹主动脉缩窄法建立心肌肥厚模型。2.用差速离心和密度梯度离心法提纯细胞核,酶学方法鉴定细胞核纯度,以Follin酚法行蛋白质定量,二苯胺法行DNA定量。3.免疫组化方法观察左室心肌组织钙感受蛋白CaMⅠ、CaMKII、CaMKIV及核转录因子CREB、pCREB的分布。4.免疫蛋白印迹法观察肥厚心肌的细胞核及细胞浆CaMⅠ、CaMKII、CaMKIV及CREB、pCREB的蛋白含量变化。5.同位素32P掺入法检测肥厚心肌的细胞核及细胞浆CaMKII和CaMKIV的活性变化。

论文目录

  • 英文缩写索引
  • 英文摘要
  • 中文摘要
  • 论文正文 核 CaMⅠ/CaMKII-CaMKIV 信号通路在大鼠肥厚心肌中的意义及对β-MHC 与c-fos 基因转录调控作用的研究
  • 前言
  • 第一部分 大鼠腹主动脉缩窄心肌肥厚模型的建立及心肌细胞核的提纯
  • 分题一 大鼠腹主动脉缩窄心肌肥厚模型的建立及评价
  • 分题二 心肌细胞核的提纯及鉴定
  • 小结
  • 第二部分 核CaMⅠ/CaMKII-CaMKIV信号通路及CREB磷酸化在大鼠肥厚心肌的变化
  • 分题一 钙感受蛋白CaMⅠ、CaMKII、CaMKIV 在心肌细胞的分布
  • 分题二 核CaMⅠ/CaMKII-CaMKIV 信号通路在肥厚心肌的变化
  • 分题三 核转录因子CREB 的磷酸化在肥厚心肌的变化
  • 小结
  • 第三部分 核CaMⅠ/CaMKII-CaMKIV信号通路对β-MHC及c-fos基因的转录调控
  • 分题一 β-MHC 和c-fos 基因在肥厚心肌的变化
  • 分题二 调控核Ca++转运对β-MHC、c-fos 基因转录的影响
  • 分题三 调控核CaMⅠ/CaMKII-CaMKIV信号通路对β-MHC、c-fos基因转录的影响
  • 小结
  • 全文总结
  • 参考文献
  • 致谢
  • 照片
  • 文献综述 心肌肥厚核钙信号通路的研究进展
  • 攻读博士学位期间发表的论文

    • 相关论文文献

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