银杏叶提取物对细胞色素P450 2E1表达的抑制作用

论文摘要

背景与目的随着我国生活条件的日益改善，肥胖人群的比例越来越高，因此患非酒精脂肪性肝病（NAFLD）的病人明显增多。现认为，“二次打击”学说可能为酒精性肝病和NAFLD的共同发病机制，酒精、肥胖、糖尿病等作为初次打击，通过引起肝细胞内甘油三酯合成与排泄之间的失衡导致脂肪储积形成单纯性脂肪肝；第二次打击是指氧应激相关的脂质过氧化及炎性细胞因子的作用，导致脂肪变的肝细胞发生炎症、坏死和纤维化。有关研究发现：酒精性脂肪肝病和非酒精脂肪性肝病的发病机制非常相似，在这些发病机制中有一个共同的联系一细胞色素P450 2E1（cytochrome P450 2E1，CYP2E1）的诱导。乙醇、脂肪酸、异烟肼和其它化学物质诱导CYP2E1，该酶的活性增高，产生了大量的氧自由基，并导致了肝脏的损害，特别是线粒体的损害，线粒体的损害又加剧了氧应激。银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract，GBE）是一种传统的中药，具有抗炎、降血脂、抗过敏等多重药理作用。国外已有文献报道，GBE可以抑制CYP2E1的活性，但未能从分子水平进行研究。本实验研究GBE对乙醇、鱼油诱导后的E47细胞内的细胞色素P450 2E1（CYP2E1）的表达和脂质过氧化的影响。方法将E47细胞（转染了CYP2E1基因地重组载体，能稳定表达CYP2E1基因的人肝癌细胞）随机分为5组对照组、乙醇组、鱼油组、GBE+乙醇组、GBE+鱼油组。在给予GBE干预之后，分别用乙醇和鱼油诱导E47细胞，通过细胞免疫染色和Western blotting观察CYP2E1的蛋白表达；以对硝基苯酚（p-nitrophenol，PNP）为探针测定全细胞CYP2E1的活性变化；测定细胞内丙二醛（MDA）和超氧化物岐化酶（SOD）的含量变化，并与对照组比较。统计工具应用SPSS 13.0软件包，统计方法采用单因素方差分析和两因素相关分析进行统计学分析，以P＜0.05为有显著性差异。结果1．免疫细胞化学染色显示，CYP2E1在对照E47细胞中的表达主要为胞浆表达；在乙醇和鱼油诱导组中，CYP2E1的表达比对照组明显加深（P＜0.05），且有的细胞可见核型表达；GBE+乙醇组和GBE+鱼油组中,CYP2E1的表达强度分别比乙醇组、鱼油组低（P＜0.05），与对照组相似。阴性对照未见着色。2．Western blotting结果显示对照组的CYP2E1和GADPH积分光密度之比为1.195±0.287，乙醇组为2.911±0.642；鱼油组为2.691±0.448；GBE+乙醇组1.073±0.370；GBE+鱼油组1.345±0.168；乙醇组、鱼油组均高于对照组，都有显著性差异（P＜0.05）；GBE+乙醇组低于乙醇组，GBE+鱼油组低于鱼油组，且都有显著性差异（P＜0.05）；GBE+乙醇组、GBE+鱼油组与对照组相比无差异（P＞0.05）。3．E47细胞CYP2E1的活性测定显示，与对照组相比，乙醇和鱼油诱导组全细胞CYP2E1活性增强（P＜0.05）；GBE+乙醇组较乙醇组、GBE+鱼油组较鱼油组表达均有降低（P＜0.05），并且均有显著性差异。4．GBE能明显降低细胞内MDA，升高SOD，乙醇组及鱼油组与对照组相比，MDA水平显著升高，SOD水平显著降低；而GBE+乙醇组和GBE+鱼油组的MDA、SOD又恢复至近似对照组的水平。5．E47细胞内CYP2E1表达的灰度值与MDA的含量成正相关（r=0.850，P＜0.01），而与SOD成负相关（r=—0.826，P＜0.01）；MDA与SOD成负相关（r=—0.759，P＜0.01）。结论GBE可以显著抑制E47细胞的CYP2E1的表达，降低CYP2E1的活性；同时还可减轻脂质过氧化。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分 银杏叶提取物对细胞色素P450 2E1表达的抑制作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述部分
• 细胞色素P450 Ⅱ E1与酒精性肝病和NASH
• 参考文献
• 后记
• 英文缩略词表
• 致谢