67kDa层粘连蛋白受体反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞侵袭转移的实验研究

论文题目: 67kDa层粘连蛋白受体反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞侵袭转移的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 妇产科学

作者: 张向宁

导师: 汤春生

关键词: 反义寡核苷酸,凋亡,侵袭力,转染,基质金属蛋白酶

文献来源: 山东大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的 采用细胞培养的技术体外培养四种卵巢癌细胞株,观察其生长特点、镜下形态及分裂增殖能力差别。并分别收集四种卵巢癌细胞采用免疫细胞化学和RT-PCR的方法检测各株细胞中67kDa层粘连蛋白受体(67kDa LN-R)的表达情况,确定67kDa LN-R表达阳性的细胞株,为进一步研究其在卵巢癌侵袭转移机制中的作用奠定理论基础。 方法 复苏冻存卵巢癌细胞株HRA、SKOV3、3AO、OVCAR3,分别培养于加入10%新生牛血清、1×10~5 IU/L青霉素、100 mg/L链霉素的RPMI 1640培养液中,在37℃、5%二氧化碳培养箱中培养并传代至对数生长期。根据四种细胞分裂增殖情况绘制生长曲线,并利用Giemsa染色观察比较四种细胞形态差别。将四种细胞分别制成细胞飞片,采用免疫细胞化学的方法检测67kDa LN-R蛋白表达情况,分别收取10~6个卵巢癌细胞,运用RT-PCR半定量的方法检测各株细胞mRNA水平67kDa LN-R的表达情况,以确定67kDa LN-R阳性表达细胞株。 结果 免疫细胞化学检测卵巢癌细胞67kDa LN-R蛋白表达结果:SABC法所显示的LN-R阳性表达为棕黄色染色,HRA、SKOV3、3AO卵巢癌细胞的细胞膜及细胞浆均见明显棕黄色颗粒表达,而OVCAR3卵巢癌细胞未见阳性染色。RT-PCR检测结果示HRA、SKOV3均可见明显的约为474bp的67kDa LN-R的特异性条带,3AO细胞特异性条带较弱,而OVCAR3为阴性表达。 结论 卵巢癌细胞HRA、SKOV3的67kDa层粘连蛋白受体mRNA及蛋白水卵巢癌细胞;细胞培养;67kDa层粘连蛋白受体;表达山东人学博十学位论文巢癌细胞HRA24至48小时内部分细胞变圆,细胞内出现毒性颗粒,并出现凋亡小体。更换培养液后48至72小时细胞生长状况恢复。MTT检测活细胞比率及流式细胞术凋亡检测结果示转染后细胞增殖均受到抑制。免疫细胞化学、流式细胞仪法显示转染67kDa LN-R ASODN与对照组相比,HRA细胞67kDa LN一R蛋白表达明显减弱;半定量RT-PCR法结果显示转染ASODN后HRA 67kDa LN一R的mRNA表达亦明显降低。Transwell小室检测转染0.02 ug/ ul、0.04 ug/ ul、0.08 ug/ul层粘连蛋白受体反义寡核普酸组与对照组相比对细胞的侵袭力依次降低,且不同剂量之间的差别也有显著性(P<0.05)。免疫细胞化学检测转染ASODN后卵巢癌细胞HRA随反义核酸浓度的增加MMP一2表达逐渐降低,而转染ASODN后SKOV3卵巢癌细胞KAn肿瘤抑制基因的表达呈现递增趋势。 结论本实验所设计的67kDa LN一 R ASODN能有效的抑制卵巢癌细胞HRA67kDa层粘连蛋白受体的蛋白表达和基因表达,并明显抑制了卵巢癌细胞体外侵袭转移能力,且出现剂量依赖性。67kDa LN--R ASODN能影响卵巢癌细胞肿瘤转移相关因子MMP一2和KAll的表达。 关键词反义寡核昔酸;凋亡;侵袭力;转染;基质金属蛋白酶一2; KAn/C D82

论文目录:

中文摘要

论文一

论文二

英文摘要

论文一

论文二

英文缩略语

论文一 67kDa层粘连蛋白受体在卵巢癌细胞株中表达的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

附图

论文二 67kDaLN-R反义寡核苷酸转染抑制卵巢癌细胞HRA侵袭转移的体外实验研究

前言

材料与方法

结果

讨论

附图

参考文献

致谢

攻读博士学位期间发表的文章目录

发布时间: 2005-06-14

参考文献

• [1].miR-124通过靶向PDCD6抑制卵巢癌细胞及诱导凋亡机制的研究[D]. 袁犁.重庆医科大学2016
• [2].Claudin-6对卵巢癌细胞SKOV3生物学行为影响的研究[D]. 刘娇阳.南方医科大学2018
• [3].抑制miR-23a表达增强卵巢癌细胞顺铂敏感性的分子机制研究[D]. 金爱红.安徽医科大学2016
• [4].SOS1/EPS8/ABI1在卵巢癌细胞转移起始中的作用及其靶向短肽抑制剂抗转移活性的研究[D]. 余雪琛.武汉大学2015
• [5].茶黄素的UPLC分析及其对人卵巢癌细胞抑制作用和机制的研究[D]. 潘海波.浙江大学2018
• [6].Evi1表达对卵巢癌细胞生物学行为及化疗敏感性影响的初步研究[D]. 李霞.郑州大学2018
• [7].MARCH1促进上皮性卵巢癌恶性生物学行为及其机制的研究[D]. 孟莹.重庆医科大学2018
• [8].糖皮质激素对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制研究[D]. 王燕.第二军医大学2016
• [9].肿瘤干细胞靶向杀伤病毒表达系统对卵巢癌细胞生物学性状影响的研究[D]. 龙启芳.南京医科大学2017
• [10].营养饥饿增加卵巢癌细胞对BH3模拟物凋亡敏感性及机制研究[D]. 王思.吉林大学2017

相关论文

• [1].EphA2及其配体EphrinA1在宫颈鳞癌中的表达及EphA2表达的体外抑制研究[D]. 吴丹.郑州大学2004
• [2].hTERT启动子调控的HSV-tk基因治疗系统对卵巢癌细胞的作用[D]. 郭玉忠.郑州大学2004
• [3].拓扑替康腹腔化疗治疗浆液性卵巢癌的实验研究[D]. 易晓芳.复旦大学2004
• [4].趋化因子受体在浆液性上皮性卵巢癌腹腔内转移中的作用[D]. 徐常恩.复旦大学2004
• [5].携带野生型PTEN基因的重组腺病毒（Ad-PTEN）治疗子宫内膜癌的实验研究[D]. 刘玉环.第二军医大学2004
• [6].卵巢癌相关新基因NM23-H1B的克隆和功能研究[D]. 李文.第二军医大学2004
• [7].靶向H-ras基因的小干扰性RNA联合能量可控陡脉冲治疗卵巢癌的实验研究[D]. 王萍玲.重庆医科大学2005
• [8].VEGF对CD34～+造血干/祖细胞来源的树突状细胞分化和功能的影响及其在卵巢癌免疫中的作用和相关机制[D]. 叶枫.浙江大学2005
• [9].基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与卵巢癌浸润转移关系的研究[D]. 胡晓霞.广西医科大学2005
• [10].Ki67核抗原、MMP-2（基质金属蛋白酶-2）、TIMP-2（基质金属蛋白酶-2抑制因子）、CD147、LN-R（层粘连蛋白受体）的表达与侵袭性垂体腺瘤的关系[D]. 郭永川.吉林大学2005

标签：反义寡核苷酸论文;  凋亡论文;  侵袭力论文;  转染论文;  基质金属蛋白酶论文;