本文主要研究内容
作者甲承立（2019）在《α-乳白蛋白源DPP-4抑制肽的制备以及结构解析与功能评价》一文中研究指出：糖尿病是全球三大流行病之一,其中二型糖尿病(T2DM)占90%以上。近些年来,具有比化学合成类药物更多优势的食品源降糖物质被开发出来并得以应用,如谷类蛋白,鱼肉蛋白及乳蛋白。据文献报道,α乳白蛋白作为DPP-4抑制肽的来源具有较高的潜力。因此,本文以商品化的α-乳白蛋白为原料,利用中心组合-响应面实验(CCD-RSM)水解样品,经过分离纯化,鉴定与合成,得到DPP-4活性肽序列,进行体外抑制活性及功能的化学验证及模型细胞验证。主要结论如下:1、α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ(DPP-4)是Ⅱ型糖尿病的治疗中两种重要的靶向酶。市售的商品化酶来源主要为微生物源,与哺乳动物来源的酶的性质有一定的差异,难以客观的评价这两种酶的抑制剂的筛选。本研究收集新鲜的猪小肠黏膜分泌物及上皮细胞,以现有商业化酶做对照,分析不同部位猪小肠黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4酶活及比活力,确定合适的稀释倍数及有效部位,建立了猪小肠源α-葡萄糖苷酶和DPP-4的酶活测定体系,为本研究α-葡萄糖苷酶和DPP-4抑制剂的体外筛选提供可靠的测定方法体系及低廉的酶来源。2、为了更有效的获得来源于α乳白蛋白源的DPP-4抑制活性肽,设计单因素实验获得四个因素的中心点,在此基础上,利用中心组合实验(CCD)对获得的30组响应值依次测定DPP-4抑制活性,此后进行响应面分析,进行二次非线性回归拟合,回归模型具有高度显著性(P<0.0001)。这表明该模型可用于筛选水解条件。根据此模型预测的最佳酶解条件:酶解温度41.5℃、酶解时间129min、胰蛋白酶量4537U/g pro、α乳白蛋白浓度:7%。3、为了进一步甄别α乳白蛋白酶水解物中具有DPP-4抑制活性的肽,本研究采用膜分离串联蛋白分离纯化系统对酶的水解物进行分离纯化,使用LC-MS/MS进行序列鉴定,根据序列评分,获得来源于α乳白蛋白的六组肽序列。同时采用化学固相合成这六组肽,对这六组肽进行体外抑制活性验证。结果表明活性肽LDQWLCEKL的活性最高,DPP-4半数抑制浓度(IC50)达到131.07μm。此外还使用Lineweaver-Buck双倒数法分析了活性肽的抑制类型,证明LDQWLCEKL的抑制类型为非竞争性抑制。4、以NCI-H716细胞为模式细胞,分别以不同浓度的合成肽与细胞作用不同时间,分别测定细胞内、外DPP-4的相对活性及GLP-1的含量。阳性药LGT能够有效抑制DPP-4及GLP-1的表达及相对活性,并体现出了良好的浓度和时间依赖性。活性肽的效果不尽相同,LDQ能够降低细胞内DPP-4的相对活性,但其他四组活性肽的抑DPP-4效果并不明显;GLP-1方面,活性肽LDQ能够促进GLP-1的分泌和表达,而活性肽ILD无法促进GLP-1的表达和分泌。
Abstract
tang niao bing shi quan qiu san da liu hang bing zhi yi ,ji zhong er xing tang niao bing (T2DM)zhan 90%yi shang 。jin xie nian lai ,ju you bi hua xue ge cheng lei yao wu geng duo you shi de shi pin yuan jiang tang wu zhi bei kai fa chu lai bing de yi ying yong ,ru gu lei dan bai ,yu rou dan bai ji ru dan bai 。ju wen suo bao dao ,αru bai dan bai zuo wei DPP-4yi zhi tai de lai yuan ju you jiao gao de qian li 。yin ci ,ben wen yi shang pin hua de α-ru bai dan bai wei yuan liao ,li yong zhong xin zu ge -xiang ying mian shi yan (CCD-RSM)shui jie yang pin ,jing guo fen li chun hua ,jian ding yu ge cheng ,de dao DPP-4huo xing tai xu lie ,jin hang ti wai yi zhi huo xing ji gong neng de hua xue yan zheng ji mo xing xi bao yan zheng 。zhu yao jie lun ru xia :1、α-pu tao tang gan mei he er tai ji tai mei Ⅳ(DPP-4)shi Ⅱxing tang niao bing de zhi liao zhong liang chong chong yao de ba xiang mei 。shi shou de shang pin hua mei lai yuan zhu yao wei wei sheng wu yuan ,yu bu ru dong wu lai yuan de mei de xing zhi you yi ding de cha yi ,nan yi ke guan de ping jia zhe liang chong mei de yi zhi ji de shai shua 。ben yan jiu shou ji xin xian de zhu xiao chang nian mo fen bi wu ji shang pi xi bao ,yi xian you shang ye hua mei zuo dui zhao ,fen xi bu tong bu wei zhu xiao chang nian mo di qu wu de α-pu tao tang gan mei he DPP-4mei huo ji bi huo li ,que ding ge kuo de xi shi bei shu ji you xiao bu wei ,jian li le zhu xiao chang yuan α-pu tao tang gan mei he DPP-4de mei huo ce ding ti ji ,wei ben yan jiu α-pu tao tang gan mei he DPP-4yi zhi ji de ti wai shai shua di gong ke kao de ce ding fang fa ti ji ji di lian de mei lai yuan 。2、wei le geng you xiao de huo de lai yuan yu αru bai dan bai yuan de DPP-4yi zhi huo xing tai ,she ji chan yin su shi yan huo de si ge yin su de zhong xin dian ,zai ci ji chu shang ,li yong zhong xin zu ge shi yan (CCD)dui huo de de 30zu xiang ying zhi yi ci ce ding DPP-4yi zhi huo xing ,ci hou jin hang xiang ying mian fen xi ,jin hang er ci fei xian xing hui gui ni ge ,hui gui mo xing ju you gao du xian zhe xing (P<0.0001)。zhe biao ming gai mo xing ke yong yu shai shua shui jie tiao jian 。gen ju ci mo xing yu ce de zui jia mei jie tiao jian :mei jie wen du 41.5℃、mei jie shi jian 129min、yi dan bai mei liang 4537U/g pro、αru bai dan bai nong du :7%。3、wei le jin yi bu zhen bie αru bai dan bai mei shui jie wu zhong ju you DPP-4yi zhi huo xing de tai ,ben yan jiu cai yong mo fen li chuan lian dan bai fen li chun hua ji tong dui mei de shui jie wu jin hang fen li chun hua ,shi yong LC-MS/MSjin hang xu lie jian ding ,gen ju xu lie ping fen ,huo de lai yuan yu αru bai dan bai de liu zu tai xu lie 。tong shi cai yong hua xue gu xiang ge cheng zhe liu zu tai ,dui zhe liu zu tai jin hang ti wai yi zhi huo xing yan zheng 。jie guo biao ming huo xing tai LDQWLCEKLde huo xing zui gao ,DPP-4ban shu yi zhi nong du (IC50)da dao 131.07μm。ci wai hai shi yong Lineweaver-Buckshuang dao shu fa fen xi le huo xing tai de yi zhi lei xing ,zheng ming LDQWLCEKLde yi zhi lei xing wei fei jing zheng xing yi zhi 。4、yi NCI-H716xi bao wei mo shi xi bao ,fen bie yi bu tong nong du de ge cheng tai yu xi bao zuo yong bu tong shi jian ,fen bie ce ding xi bao nei 、wai DPP-4de xiang dui huo xing ji GLP-1de han liang 。yang xing yao LGTneng gou you xiao yi zhi DPP-4ji GLP-1de biao da ji xiang dui huo xing ,bing ti xian chu le liang hao de nong du he shi jian yi lai xing 。huo xing tai de xiao guo bu jin xiang tong ,LDQneng gou jiang di xi bao nei DPP-4de xiang dui huo xing ,dan ji ta si zu huo xing tai de yi DPP-4xiao guo bing bu ming xian ;GLP-1fang mian ,huo xing tai LDQneng gou cu jin GLP-1de fen bi he biao da ,er huo xing tai ILDmo fa cu jin GLP-1de biao da he fen bi 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的甲承立，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于型糖尿病论文,二肽基肽酶论文,乳白蛋白源论文,胰高血糖素样肽论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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