PAI-1在LPS诱导的急性肺损伤中的作用和可能机制

论文摘要

目的:研究纤溶酶原激活物抑制物-1（PA1-1）在脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤中的表达水平及可能的作用机制。方法:在体外实验中,采用LPS刺激肺上皮细胞系A549,分别在4小时、8小时、12小时和24小时各时间点观察PA1-1和其他炎症介导基因在mRNA水平的表达改变。另外,采用不同剂量的LPS刺激A549细胞,进一步明确PA1-1与炎症介质LPS的剂量依赖性。在体内实验中,给予野生型C57/BL6小鼠气管内滴注LPS建立急性肺损伤的模型。通过ELISA测定了血浆中PA1-1的含量,并通过实时定量RT-PCR测定在各个时间点,PA1-1和其他炎症介导基因的表达改变谱,从而揭示PA1-1在急性肺损伤中的作用和可能的机制。结果:体外实验结果显示,A549细胞在LPS刺激后随着时间的改变,PA1-1的表达水平显著升高,在4小时其表达水平与生理盐水对照组相比已达2.24倍,持续升高达12小时,24小时时恢复正常;在给予LPS1mg/ul刺激后12小时,随着LPS的剂量增加,1ug/ml、5ug/ml和10ug/ml,PA1-1、MMP2和PPAR-γ的表达呈剂量依赖性。气管内滴注5mg/kg LPS,成功建立了急性肺损伤模型。血浆中PA1-1在LPS刺激后4小时显著升高,24小时后更加明显。同样,随着时间的改变,肺内PA1-1 mRNA表达也随之上调,最高达28倍。同时,MMP9、IL-1β和NF-kB的mRNA水平也明显升高,而PPAR-γ和MMP2的表达水平反之下降。结论:在LPS诱导的急性肺损伤中,肺内PA1-1 mRNA水平和血浆中含量在LPS刺激的早期即被显著上调,具有作为潜在的急性肺损伤早期诊断的标记物和治疗靶点。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 背景
• 材料与方法
• 一.材料
• （一） 细胞系
• （二） 实验动物
• （三） 主要试剂
• （四） 实验仪器
• （五） 主要试剂溶液的配制
• 二.实验方法
• （一） A549细胞的复苏和传代
• （二） LPS刺激A549细胞
• （三） 动物模型的建立和标本的采集
• （四） BALF蛋白定量
• （五） ELISA法测量血浆中PAI-1含量
• （六） 实时定量RT-PCR（Real-time RT-PCR）
• （七） 统计学分析
• 结果
• 一.体外实验
• （一） A549细胞培养
• （二） LPS刺激后基因表达的改变
• 二.体内实验
• （一） 实验动物分组
• （二） 给药前后肺组织HE染色
• （三） LPS刺激后BALF的蛋白浓度
• （四） LPS刺激后血浆中PAI-1改变（ELISA）
• （五） PAI-1及其他基因在LPS刺激后表达的改变
• 讨论
• 参考文献
• 附录1.论文发表情况
• 附录2.综述
• 致谢