论文摘要
丙烯酰胺（acrylamide，AA）为白色晶体物质，是一种重要的化工原料，广泛用于饮水净化、污水处理、造纸、采矿业及科研实验等。丙烯酰胺可经皮肤迅速吸收，是一种重要的职业接触化合物。此外，丙烯酰胺主要在高碳水化合物、低蛋白质的植物性食物加热（120℃以上）烹调过程中形成，成为非职业人群暴露的一个重要途径，因而引起广泛的关注。人体还可能通过吸烟的途径接触丙烯酰胺。丙烯酰胺具有多种毒性，可影响雄性动物生殖和发育，但其作用机制目前尚不清楚。以往研究中多采用高剂量急性染毒，而对丙烯酰胺经口长期染毒所产生的生殖毒性作用的报道较少。本研究采用亚慢性毒性试验，结合整体动物研究和体外实验，系统研究了丙烯酰胺对雄性大鼠生殖机能、脂质过氧化水平和睾丸生殖内分泌功能的影响，旨在探究丙烯酰胺对雄性生殖及睾丸内分泌功能活动产生的影响，为进一步研究丙烯酰胺对雄性生殖毒性作用及其机制提供科学依据。一、丙烯酰胺对雄性大鼠生殖功能的影响8周龄体重（200±10）g健康雄性SD大鼠40只，随机分成4组，每组10只。灌胃给予丙烯酰胺，剂量为0（对照组）、4、10、18 mg／kg．d，每周染毒6d，共染毒9周。观察动物一般情况、体重以及脏器系数的变化。染毒结束后，测量后肢支撑力，处死大鼠收集睾丸、附睾和血清。测定精子存活率、精子畸形率、睾丸匀浆中碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）、乳酸脱氢酶（LDH）和γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）活性。结果表明：随着染毒剂量的增加，各剂量组与对照组比较，后肢展开距离显著加宽（P＜0．01），精子存活率显著下降（P＜0．01）。10 mg／kg．d和18 mg／kg．d剂量组精子畸形率明显上升（P＜0．05）。ACP活性呈下降趋势，ALP活性呈现先上升后下降的趋势，两者的活性在18 mg／kg．d剂量组与对照组比较差异显著（P＜0．05）。LDH活性有下降的趋势，γ-GT活性有上升的趋势，但两者各组间比较差异都不显著（P＞0．05）。二、丙烯酰胺对雄性大鼠脂质过氧化水平的影响染毒结束后，处死大鼠收集睾丸及其他脏器和血清，测定血清和睾丸匀浆中丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果表明：各剂量组与对照组比较，血清中的GSH水平、MDA水平、GSHPx活性和SOD活性，无明显差异（P＞0．05）；而睾丸匀浆中GSH水平和SOD活性显著下降（P＜0．01），GSHPx活性也显著受到抑制（P＜0．05），MDA水平无显著差异（P＞0．05）。三、丙烯酰胺对雄性大鼠睾丸生殖内分泌功能的影响染毒结束后，测定血清和睾丸匀浆中睾酮（T）及17β-雌二醇（17β-E2）浓度。分离纯化睾丸Leydig细胞，建立睾丸Leydig细胞体外原代培养模型。Leydig细胞培养24h后，通过CCK-8法测定各剂量组Leydig细胞活性并测定细胞培养液T浓度。体外丙烯酰胺染毒剂量分为对照（0mmol／L）、0．1、0．75、4、8mmol／L，同样通过CCK-8法观察Leydig细胞活性。结果表明：各染毒剂量组血清和睾丸匀浆中T显著下降（P＜0．05），17β-E2水平无明显差异，Leydig细胞活性明显受到抑制（P＜0．01），细胞培养液T浓度显著降低（P＜0．01）。体外丙烯酰胺染毒24h后，Leydig细胞活性受到显著抑制（P＜0．01）。以上结果表明亚慢性丙烯酰胺染毒损伤雄性生育能力，影响生精过程中有关一些特征酶活性，睾丸是丙烯酰胺毒性作用的重要靶器官，大鼠后肢运动协调性明显受到影响；破坏睾丸氧化-抗氧化系统的平衡，诱导雄性大鼠睾丸氧化损伤的增加，脂质过氧化可能是丙烯酰胺导致睾丸毒性作用的机制之一；影响睾丸Leydig细胞的功能，改变了雄性大鼠体内T／E2分泌水平，干扰了正常的雄性生殖内分泌功能。