载蛋白药物双层微球的制备和性质研究

论文摘要

近年来,多肽和蛋白质类药物的缓释或控释给药系统发展很快,尤其倾向于使用以生物可降解材料为载体制备毫微球或微球长效注射剂。多肽及蛋白类药物微球给药系统具有缓释长效作用,因而成为生物技术类药物制剂研究的热点。目前,各种微球的制备方法容易破坏多肽及蛋白质类药物的稳定性,加上多肽及蛋白质自身结构复杂,造成蛋白质活性丧失,因此,在制备多肽及蛋白质类药物微球时,如何根据药物不同特征选择合适的辅料和制备方法,设计出安全、有效和稳定的多肽和蛋白质药物给药系统是制药业面临的问题。双层微球是近年来发展较快的一种微球制剂形式,它不仅克服了传统单层微球的一些缺点,比如减少了单层微球的突释,改变释放模式使其更符合人体的需要:而且其制备方法简单,相对温和,对蛋白药物制剂的制备非常适合。针对上述问题,本研究制备了载蛋白药物的双层微球,具体内容如下:（1）采用天然高分子壳聚糖和透明质酸钠作为载体,利用乳化凝聚方法制备壳聚糖—透明质酸钠（CHS—HA）双层微球,通过扫描电镜、粒径分析、Zeta电位分析仪以及傅立叶红外对其性质进行表征;探讨制备过程中的多个因素对于微球制备的影响。CHS-HA微球形态圆,表面光滑,平均粒径为12.19±1.37μm,内核多孔,外层致密;制备过程中的外水相pH值、三聚磷酸钠的浓度、搅拌时间以及表面活性剂的添加都是影响微球制备的重要因素;外水相体积和透明质酸钠浓度也对微球形态具有明显的影响;（2）以胰岛素为模型药物,制备了载胰岛素壳聚糖—透明质酸钠双层微球,考察胰岛素的包封率和微球载药量,并对双层微球进行正交设计,优化实验方案。通过微球包封率和载药量的正交设计结果得出优化条件为:外水相体积为40mL:pH为6.0,透明质酸钠浓度为0.025%,搅拌时间为3h:此时,微球的包封率为（76.46±1.52）%,载药量为（31.28±1.91）%。（3）考察了两种微球的体外释放,进行机制探讨,并进行数学模型拟合。同时,通过放射免疫法测定了释放介质中的胰岛素的含量,反映胰岛素的活性。双层微球的体外释放分为快速释放相和缓慢释放相两相,分别符合零级动力学方程模型;胰岛素的放射免疫测定结果证明胰岛素在微球制备、储存、释放过程中活性保持良好。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 文献综述
• 1. 微球制剂的现状和发展趋势
• 2. 双层微球
• 3. 壳聚糖微球的研究进展
• 4. 蛋白药物控释技术的研究进展
• 5. 研究课题的提出
• 6. 研究的创新点
• 7. 参考文献
• 第二部分 壳聚糖—透明质酸钠微球的制备及其性质研究
• 前言
• 1. 试剂和仪器
• 2. 实验方法
• 2.1 壳聚糖的提纯
• 2.2 微球的制备
• 2.3 壳聚糖—透明质酸钠双层微球的表征
• 2.4 统计学处理
• 3. 结果与讨论
• 3.1 微球表面及截面的SEM观察
• 3.2 微球粒径分析
• 3.3 微球表面Zeta电位测定
• 3.4 微球FTIR测定
• 4. 小结
• 5. 参考文献
• 第三部分 壳聚糖—透明质酸钠微球制备过程中的因素及其影响研究
• 前言
• 1. 试剂和仪器
• 2. 实验方法
• 2.1 CHS-HA微球的制备
• 2.2 影响因素的考察
• 2.3 壳聚糖—透明质酸钠微球的表征
• 3. 结果与讨论
• 3.1 最佳反应pH值的沉淀法测定结果
• 3.2 油水体积比对CHS-HA微球制备的影响
• 3.3 表面活性剂对CHS-HA微球制备的影响
• 3.4 外水相pH对CHS-HA微球制备的影响
• 3.5 外水相浓度对CHS-HA微球制备的影响
• 3.6 搅拌时间对CHS-HA微球制备的影响
• 3.7 搅拌速度对CHS-HA微球制备的影响
• 4. 小结
• 5. 参考文献
• 第四部分 载胰岛素壳聚糖—透明质酸钠微球的制备及性质研究
• 前言
• 1. 试剂和仪器
• 2. 实验方法
• 2.1 载胰岛素CHS-HA双层微球的制备
• 2.2 包封率和载药量测定
• 2.3 正交设计筛选处方
• 2.4 单双层微球包封率和载药量比较
• 2.5 统计学处理
• 3. 结果与讨论
• 3.1 胰岛素的高效液相色谱图
• 3.2 胰岛素的标准曲线和方程
• 3.3 测定方法回收率考察结果
• 3.4 测定方法精密度测定
• 3.5 正交设计实验包封率和载药量测定结果
• 3.6 最佳制备工艺的确定
• 3.7 单、双层微球包封率和载药量
• 4. 小结
• 5. 参考文献
• 第五部分 载胰岛素壳聚糖—透明质酸钠微球的体外释放及胰岛素活性研究
• 前言
• 1. 试剂和仪器
• 2. 实验方法
• 2.1 CHS-TPP微球和CHS-HA微球的制备
• 2.2 胰岛素体外释放测定
• 2.3 活性胰岛素含量测定
• 2.4 统计学处理
• 3. 结果与讨论
• 3.1 释放测定方法回收率及释放介质的选择
• 3.2 胰岛素在释放介质中的稳定性考察
• 3.3 体外释放曲线
• 3.4 胰岛素微球体外释药的规律
• 3.5 释药曲线的方程拟合
• 3.6 RIA测定胰岛素活性标准曲线的绘制
• 3.7 放射免疫法测定胰岛素活性的回收率实验
• 3.8 放射免疫法测定胰岛素累积释放曲线
• 4. 小结
• 5. 参考文献
• 全文总结
• 致谢