论文摘要
目的:本研究通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病大鼠模型,应用健脾补肾活血方对糖尿病大鼠进行干预治疗,通过观察该药对糖尿病大鼠模型血糖、血脂、肾功能、24小时尿白蛋白排泄率、肾脏病理形态学、肾重/体重的比值、血浆及肾组织中AngⅡ含量、以及肾组织中TGF-β1表达的改变,研究健脾补肾活血方对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制,为其临床应用提供可靠的研究基础。方法:选用健康SD大鼠（雄性,体重180±20g）46只,普通饲料适应性喂养1周,检测血糖、尿糖均为阴性,按体重随机分为正常组（10只）、模型组（12只）、苯那普利组（12只）、健脾补肾活血方组（12只）,除正常组外,其它三组均采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病模型,造模72小时后测血糖超过16.7mmol/L即确定为糖尿病模型大鼠。正常组注射相当体积的柠檬酸缓冲液。造模第三天,模型组、苯那普利组、健脾补肾活血方组,分别给予自来水、苯那普利10㎎/㎏、健脾补肾活血方灌胃7.5㎎/㎏,每日一次。正常组也给予相同体积的自来水灌胃。实验期间,各组动物自由进食、饮水。于实验第8周,大鼠用代谢笼留取24h尿液,用放射免疫法测定尿微量白蛋白,计算尿白蛋白排泄率（UAER）,并测尿肌酐（Ucr）。于第8周末,全部动物被处死,用全自动生化分析仪检测各组大鼠血糖、总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）,计算内生肌酐清除率（Ccr）。用放免法测血浆AngⅡ含量。大鼠麻醉后,迅速取出双肾,去包膜后,双肾称重,并测肾重/体重比值。左肾固定后石蜡包埋,切成4μm厚的切片行HE染色和PAS染色。光镜下观察肾脏病理形态学变化。右肾于矢状面纵向切开后,取部分右肾组织匀浆后离心,取上清备测肾组织AngⅡ含量。右肾余组织置10%福尔马林溶液中,常规固定,石蜡包埋切片备用,待用免疫组化法检测TGF-β1在肾小球及肾小管的表达情况,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果:⑴血糖:造模后糖尿病各组大鼠均出现血糖增高,与正常组比较有显著性差异（P<0.01）,健脾补肾活血方组有一定的降糖作用,与模型组比较有显著性差异（P<0.01）,苯那普利组降糖效果不显著,健脾补肾活血方组与其比较有显著性差异（P<0.01）。⑵血脂:第8周末检测血脂,除正常组外,其余各组均出现血脂增高,与正常组比较均有显著性差异（P<0.01）。苯那普利治疗对血脂影响不大,与模型组比较无显著性差异。健脾补肾活血方治疗能降低TG和TC水平,与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。⑶肾功能:模型组BUN、Scr、Ccr与正常组比较有显著性差异（P<0.01）。健脾补肾活血方组和苯那普利组均能降低BUN、Scr、Ccr水平,与模型组比较有显著性差异（P<0.01）,两组间比较无显著性差异（P>0.05）。⑷24h尿白蛋白排泄率:第8周时,模型组24h尿白蛋白排泄率明显高于正常组（P<0.01）,健脾补肾活血方组24h尿白蛋白排泄率明显降低,与模型组比较有显著性差异（P<0.01）,与苯那普利组比较无统计学意义（P>0.05）。⑸肾重/体重的比值:模型组肾重/体重的比值明显高于正常组（P<0.01）。苯那普利组与健脾补肾活血方组肾重/体重的比值明显低于模型组,与模型组比较有显著性差异（P<0.01）。两者之间无显著性差异（P>0.05）。⑹血浆及肾组织中AngⅡ含量:模型组血浆及肾组织中AngⅡ含量均高于正常组（P<0.01）。苯那普利组血浆及肾组织中AngⅡ含量明显低于模型组（P<0.01）。健脾补肾活血方组AngⅡ含量低于模型组（P<0.01）,但高于苯那普利组（P<0.01）。⑺肾组织病理形态学观察:模型组光镜下可见肾小球体积增大,球囊增大呈分叶状,肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜细胞增生,系膜区增宽,系膜基质PAS染色呈强阳性,肾小管上皮细胞肿胀变性（见附图12、13、14、15）。健脾补肾活血方组及苯那普利组大鼠肾组织病变如肾小球基底膜增厚及系膜细胞增生比模型组有明显改善,系膜区PAS染色阳性物质明显减少（见附图16、17、18、19）。⑻肾组织中TGF-β1免疫组化结果:正常大鼠的肾小球脏层上皮细胞和肾小管上皮细胞有少量TGF-β1阳性表达。模型组大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1表达显著增加,肾小球脏层上皮细胞TGF-β1表达也增加。健脾补肾活血方组和苯那普利组较模型组的表达明显减少,与模型组比较有明显减少（P<0.01）。健脾补肾活血方组和苯那普利组比较无明显差异（P>0.05）。结论:1健脾补肾活血方可降低糖尿病大鼠血糖、改善脂代谢、降低BUN、Scr及Ccr,保护肾功能。2健脾补肾活血方阻止糖尿病大鼠肾脏肥大,改善肾脏形态结构的同时还可以降低血管紧张素水平和TGF-β1的表达,一定程度上可改善糖尿病的肾损害,延缓肾脏纤维化进程。3健脾补肾活血方对糖尿病大鼠模型的干预作用与苯那普利基本相同,在降糖、改善脂代谢方面明显优于苯那普利。
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