论文摘要
目的:观察低分子肝素对博莱霉素诱发的大鼠肺纤维化模型的治疗作用,通过比较正常对照组、模型组、激素组和低分子肝素组大鼠肺组织中的羟脯氨酸（HYP）和酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）、血清及肺泡灌洗液中的（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的水平,来探讨低分子肝素治疗肺纤维化的可能作用机制,为临床低分子肝素治疗肺纤维化患者提供理论支持。方法:选取120只雄性SD大鼠,适应性饲养一周后,随机分成正常对照组（A组）、模型组（B组）、激素组（C组）、低分子肝素组（D组）。B组、C组、D组经气管内一次性注入博莱霉素A5（5mg/kg）制作大鼠肺纤维化模型,A组气管内一次性注入等量生理盐水;C组肌肉注射地塞米松0.5mg/kg/d,D组皮下注射低分子肝素1000u/d,A组给予0.2ml生理盐水皮下注射。各组大鼠分别于造模后1天、3天、7天、14天、28天留取肺组织、血清、肺泡灌洗液。取肺组织做HE、Masson染色和免疫组化方法测定肺组织中的TGF-β1、aFGF的阳性面积比,并取肺组织测定肺组织胶原含量,取血清和肺泡灌洗液测定TGF-β1含量。观察低分子肝素治疗肺纤维化的效果。结果:1 HE染色所见:正常对照组各时相点均未出现明显的病理变化。模型组第1天肺泡腔内出现以巨噬细胞、中性粒细胞为主的急性炎症细胞浸润。第3天肺泡腔内巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞渗出增多,肺泡间隔水肿增宽,肺泡炎加重。第7天肺泡腔以慢性炎症细胞为主,形成严重肺泡炎,成纤维细胞开始增生,毛细血管增生,病灶内肺泡萎陷。第14天肺泡炎逐渐减轻,肺泡壁增厚,肺纤维组织合成增加。第28天大鼠肺组织炎症减轻,成纤维细胞增多,胶原纤维明显增多,形成灶状纤维化,部分肺泡间隔明显增宽。激素治疗组和低分子肝素治疗组肺泡间隔增宽较模型组明显减轻,单核细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润较轻,肺泡结构基本正常,纤维化的病理改变也较模型组明显减轻。2 Masson染色:正常对照组可见淡蓝色的基质胶原较少。模型组基质胶原随造模时间延长而明显增多;激素治疗组和低分子肝素治疗组各时间相基质胶原含量随造模时间延长而轻度升高,均较模型组有不同程度的减少。3肺组织羟脯氨酸（HYP）含量变化:第1天和第3天模型组和激素治疗组、低分子肝素治疗组肺组织HYP含量轻微高于正常对照组,但无统计学意义（P>0.05）,模型组HYP含量随造模时间的延长逐渐增高,而激素治疗和低分子肝素治疗组HYP含量呈低水平增高趋势。7天、14天、28天激素治疗和低分子肝素治疗组与模型组比较有统计学意义（P<0.01）。各时相激素治疗组HYP含量与低分子肝素治疗组比较无统计学意义（P>0.05）,正常对照组各时相点方差分析无统计学意义（P >0.05）。4大鼠TGF-β1含量变化:血清及肺泡灌洗液中:3天、7天、14天、28天各时间点模型组血清TGF-β1含量均较正常对照组、激素组及低分子肝素组明显增高（P<0.01）,1天点模型组TGF-β1含量稍高于其它各组,但无统计学意义（P>0.05）;各时间点低分子肝素组血清TGF-β1含量高于正常对照组（P<0.01）;激素组血清各时间点TGF-β1含量与低分子肝素治疗组比较无统计学意义（P>0.05）;肺泡灌洗液与血清各时间点TGF-β1含量变化一致。大鼠肺组织TGF-β1蛋白表达:模型组大鼠TGF-β1表达量高于正常对照组、激素组及低分子肝素组,第3-28天时间点与三组比较均有统计学意义（P<0.01）;低分子肝素组TGF-β1表达量高于正常对照组,但与正常对照组比较无统计学意义（P>0.05）;正常对照组的少数支气管粘膜上皮细胞的胞浆可发现少量TGF-β1蛋白弱表达,也可偶见TGF-β1弱阳性的肺胞巨噬细胞。5大鼠肺组织aFGF含量的变化:第1、3天时间点正常组和低分子肝素组aFGF含量无统计学意义（P>0.05）,模型组和激素组aFGF无统计学意义（P>0.05）;正常组、低分子肝素组和模型组、激素组比较有统计学意义（P<0.01）。第7、14、28天时间点,可以看到各组之间都有统计学意义（P<0.01）,其中模型组aFGF含量最高,以下依次为激素组、低分子肝素组、正常组。模型组表达aFGF的细胞数量最多,低分子肝素组仅在少量巨噬细胞中表达,正常组表达微量。结论:1低分子肝素可以减轻大鼠肺纤维化程度。2 TGF-β1在肺纤维化的病理过程中起着重要作用。3 aFGF含量和肺纤维化程度随造模时间变化趋势一致。4低分子肝素减轻大鼠肺纤维化程度可能与aFGF的抗组织损伤作用有关。