维生素D3注射液对成骨细胞功能的影响及其在乌骨鸡生产中的应用

论文摘要

维生素D对细胞分化、功能及存活有重要的作用。在骨骼中,维生素D刺激骨更新,同时阻止成骨细胞（osteoblast, OB）免于凋亡;在肌肉中,维生素D维持Ⅱ型纤维功能,保持肌肉的强度。OB是骨形成的主要功能细胞,负责骨基质的合成、分泌和矿化。体外分离培养OB是毒理学、药理学、生理学及基因工程等研究的基础。高纯度、活力强的OB是进行研究的前提。本文从乳鼠颅骨OB的分离培养开始,采用第2～5代的OB,研究了维生素D3注射液对体外培养OB功能的影响,此外,还通过注射的方法,观察了维生素D3注射液对乌骨鸡产蛋率的影响。为维生素D在临床应用的剂量选择,提供了一定的理论依据。1成骨细胞的培养与鉴定为研究各种因子对骨代谢性疾病影响的细胞水平机制,建立了体外大鼠颅骨OB分离培养的方法。采用胰酶、胶原酶两步消化法获得大鼠颅骨OB,多次低速离心纯化OB,80%融合后传代。倒置显微镜下观察OB的形态及生长情况,碱性磷酸酶（ALP）和茜素红矿化结节染色特异性鉴定OB ,MTT法测定OB增殖情况。结果,本方法分离的OB生长状态良好,纯度较高,能满足一般试验的需要。2维生素D3注射液对成骨细胞功能的影响为观察维生素D3对体外培养大鼠OB增殖和功能的影响,在体外分离培养新生大鼠颅盖骨OB的基础上,添加了不同浓度的维生素D3注射液（0,10-10、10-9、10-8 mol/L）。MTT法测定OB增殖情况,PNPP法测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性,改良von Kossa染色计数矿化结节。结果,10-9、10-8 mol/L维生素D3注射液作用前3 d较对照组显著或极显著促进OB增殖（P<0.05或P<0.01）,随时间延长,各浓度维生素D3注射液对OB增殖作用转为抑制,但差异不明显（P>0.05）。各浓度维生素D3注射液作用5、9 d均显著或极显著促进ALP活性（P<0.05或P<0.01）。10-10、10-9 mol/ L能显著促进钙化结节的形成（P<0.05）,而10-9、10- 8 mol/ L显著或极显著增加矿化结节体积（P<0.05或P<0.01）。说明,维生素D3注射液可以促进OB的成骨能力,10-9 mol/ L浓度较合适。3维生素D3注射液对乌骨鸡产蛋率的影响通过对乌骨种鸡注射不同剂量的维生素D3（1000 IU、2000 IU、4000 IU/只）,研究维生素D对产蛋率及血浆钙磷含量的影响。结果表明,在整个试验期间,对照组产蛋率保持稳定,1000 IU剂量组产蛋率呈上升趋势,4000 IU剂量组产蛋率呈下降趋势。与对照组相比,1000 IU组血浆钙含量显著升高（P<0.05）,各试验组血浆磷含量均显著高于对照组（P<0.05）;4000 IU组与对照组间血浆钙磷比例差异显著（P<0.05）。表明肌肉注射1000 IU维生素D3能提高乌鸡血浆钙磷含量和产蛋率。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 上篇 文献综述
• 第一章 维生素 D 在骨骼代谢中的作用
• 1 VDR 活性的分子水平机制
• 1.1 维生素 D 和 VDR 间的相互作用
• 1.2 维生素 D 和骨骼
• 2 骨骼中维生素 D 缺乏的意义
• 2.1 骨软化肌病
• 2.2 笼养蛋鸡骨质疏松症
• 2.3 胫骨软骨发育不良
• 3 骨更新和维生素 D
• 3.1 骨更新和维生素 D
• 3.2 脆性骨折
• 4 补充维生素 D:有作用吗？
• 5 结论
• 参考文献
• 第二章 成骨细胞生物学特性的研究
• 1 OB 的起源及生长发育
• 2 成骨细胞性骨形成的调控机制
• 3 体外培养 OB 形态学特征
• 4 体外培养 OB 的分化及蛋白表达
• 5 OB 的诱导培养的应用
• 参考文献
• 下篇 研究内容
• 第三章 成骨细胞的培养与鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂与材料
• 1.3 主要仪器
• 1.4 大鼠 OB 的分离培养
• 1.5 OB 形态学观察
• 1.6 ALP 染色
• 1.7 矿化结节染色
• 1.8 MTT 法测定 OB 活力
• 2 结果
• 2.1 大鼠 OB 的形态
• 2.2 OB 的鉴定
• 2.3 MTT 结果
• 3 讨论
• 4 总结
• 参考文献
• 3对 OB 功能的影响'>第四章 维生素 D₃对 OB 功能的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 OB 分离培养及鉴定
• 1.5 试验分组
• 1.6 MTT 法检测 OB 增殖情况
• 1.7 细胞内 ALP 活性的测定
• 1.8 改良von Kossa 染色（矿化结节）
• 1.9 统计分析
• 2 结果
• 3注射液对 OB 增殖的影响'>2.1 维生素 D₃注射液对 OB 增殖的影响
• 3注射液对 ALP 的影响'>2.2 维生素 D₃注射液对 ALP 的影响
• 3注射液对矿化结节形成的影响'>2.3 维生素 D₃注射液对矿化结节形成的影响
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 3对蛋鸡产蛋性能影响'>第五章 维生素 D₃对蛋鸡产蛋性能影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验动物及分组
• 1.3 操作步骤
• 1.4 统计分析
• 2 结果
• 3对产蛋率的影响'>2.1 维生素 D₃对产蛋率的影响
• 3对血浆钙磷含量的影响'>2.2 维生素 D₃对血浆钙磷含量的影响
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文结论
• 附录1
• 致谢