论文摘要
参考GenBank上登录的冠状病毒属各成员基因序列,根据其pol基因的一个共同保守区,设计合成一对通用型引物,通过对鸡传染性支气管炎病毒（IBV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）参考株RNA进行RT-PCR扩增,均得到预期大小为251bp的核酸片段,从而建立起以该引物为基础的通用型RT-PCR。用该通用型RT-PCR,分别检测禽疑似IBV样品64份,阳性29份;猪疑似TGEV样品26份,阳性5份。对所检测到的阳性样品的RT-PCR产物进行测序,结果显示所检测目的片段与所报道的IBV或TGEV对应基因片段相符。该引物不扩增新城疫病毒、禽流感病毒、猪繁殖呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等的核酸。表明该通用型RT-PcR能检测IBV和TGEV,从而为用该方法检测其他冠状病毒、追踪和鉴定未知冠状病毒提供了技术支持。 从带有鸡传染性支气管炎病毒（IBV）pol基因cDNA片段重组质粒中扩增、回收251bp目的片段,利用随机引物标记法制备检测IBV病毒核酸的地高辛（DIG）标记探针。该探针结合已建立的RT-PCR法,检测64份疑似临床病料,31份阳性;而RT～PCR扩增结合核酸测序确诊为阳性的只有29份。探针最低能检出量约3.4pg的IBV反转录物;与新城疫病毒、传染性袭病病毒、禽流感病毒、正常鸡胚尿囊液、正常鸡肾组织等的RT-PCR产物杂交呈阴性。表明利用DIG探针结合RT-PCR检测IBV,敏感性强,可重复性好,能克服RT-PCR非特异性反应和探针Northern杂交的不稳定性。 IBV H52疫苗接种1月龄非免疫雏鸡,采集其接种后1月内咽喉和肛门拭子,用已建立的RT-PCR/DIG方法进行检测,同时用9日龄SPF鸡胚接种阳性样品,并用RT-PCR法扩增接种样品的鸡胚尿囊液RNA。实验中,咽喉拭子最早检测到病毒是接种后第1天,检测结果为阳性的样品有第1-7天、第10天,共8份;肛门拭子最早检测到病毒是接种后第4天,阳性样品有第4、6、19、20、25、29、30天,共7份。显示弱毒疫苗接种鸡体后,在1月内能持续向外排毒。因此,IBV弱毒疫苗造成的散毒问题值得高度重视。