NF-κB抑制剂PDTC预防脑死亡猪肾脏损伤的实验研究

论文摘要

脑死亡（Brain Death，BD）供体已在临床器官移植中应用。文献表明，脑死亡供体移植后的并发症、排斥反应的程度、再移植率及死亡率都明显高于活体供体，这说明脑死亡供肾在移植以前即已发生了损伤性改变。研究表明脑死亡能单独诱导多种促炎症因子的释放，并通过神经内分泌系统激活细胞因子的级联反应，引起脏器形态、功能的改变。核因子κB（Nuclear factorκB，NF-κB）调控着细胞因子、炎症介质、生长因子及细胞黏附分子等多种基因的表达，与炎症反应、细胞凋亡和免疫应答密切相关。NF-κB过度激活是否为脑死亡致肾脏损伤的机制之一，尚待研究。吡咯二硫氨基甲酸酯（Pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）被认为是NF-κB的特异性抑制剂。研究表明PDTC在FK506、内毒素、肾切除、血管紧缩素Ⅱ导致的肾脏损伤模型中具有改善肾脏功能，减轻肾脏病理损害的作用，其作用机制是抑制NF-κB的活性。但是PDTC能否影响脑死亡状态下肾脏NF-κB的活性，并对肾脏损伤产生保护作用，国内外尚未见报道。因此，进一步研究NF-κB在脑死亡后肾脏损伤中的作用及PDTC对肾脏损伤的防护作用，将会为脑死亡供肾的保护提供理论依据。目的探讨NF-κB在猪脑死亡肾脏损伤中的作用及PDTC对猪脑死亡后肾脏的防护作用。材料方法25±4kg的健康长白猪18只，随机分为二组，每组各6只。对照组，仅开颅麻醉维持行开、关腹手术；脑死亡组，按照缓慢颅内加压法建立脑死亡模型；PDTC组于判定脑死亡后滴注PDTC（15mg/kg，加入100mL生理盐水中）；脑死亡组及对照组于同期静滴等量生理盐水；脑死亡判定的标准：①深昏迷：②瞳孔对光反射和角膜反射消失；③自主呼吸停止；④脑电图呈电静息；⑤阿托品试验阴性；⑥复核间隔时间12小时：复核结果与前述结果相同时方可判定为脑死亡；脑死亡后维持血流动力学和生命体征稳定。在脑死亡后6h、12h、24h开腹经下腔静脉取血5mL，制备血清；并切取同侧肾脏组织，部分置于4％多聚甲醛溶液固定，部分置液氮保存。ELISA法检测血清肿瘤坏死固子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平，免疫组化法检测肾脏组织中单核细胞趋化蛋白-1（Molynocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）蛋白表达，实时荧光定量PCR（real time fluorescence quantitative PCR，RT-FQ-PCR）法测定组织中NF-κB mRNA、MCP-1 mRNA表达，光镜下观察脑死亡肾脏形态变化并检测血清BUN、Cr水平。结果1．肾脏形态学改变：对照组各时间点肾脏形态基本正常；脑死亡组可见肾小管上皮细胞水肿、管腔狭窄、炎细胞浸润。同脑死亡组各对应时间点相比，PDTC组细胞水肿、管腔狭窄、炎细胞浸润减轻。2．血清BUN和Cr水平：对照组各时间点血清BUN、Cr水平无差异（P>0.05）；脑死亡组和PDTC组BUN、Cr自脑死亡6h开始升高，并持续到脑死亡后24小时，组内相邻时间点之间差异显著（P<0.05）；同脑死亡组相比，PDTC组各对应时间点血清BUN、Cr显著降低（P<0.05）。3．血清TNF-α水平：对照组各时间点血清TNF-α水平无差异（P>0.05）；脑死亡组和PDTC组TNF-α水平均自脑死亡后6h开始升高，可持续至24h，组内相邻时间点之间差异显著（P<0.05）；同脑死亡组相比，PDTC组各对应时间点血清TNF-α显著降低（P<0.05）。4．肾脏NF-κB mRNA的表达：对照组各时间点NF-κB mRNA表达无差异（P>0.05）；脑死亡组和PDTC组NF-κB mRNA表达均自脑死亡后6h开始升高，可持续至24h，组内相邻时间点之间差异显著（P<0.05）；同脑死亡组相比，PDTC组各对应时间点NF-κB mRNA显著降低（P<0.05）。5．肾脏MCP-1蛋白和mRNA表达：对照组各时间点MCP-1蛋白和mRNA的表达均无差异（P>0.05）；脑死亡组和PDTC组MCP-1蛋白和mRNA表达水平均自6h开始升高，组内相邻时间点之间差异显著（P<0.05）；同脑死亡组相比，PDTC组各对应时间点MCP-1蛋白和mRNA显著降低（P<0.05）。结论1．脑死亡后肾脏损伤与NF-κB介导的炎症反应关系密切2．NF-κB抑制剂PDTC可以减轻脑死亡猪肾脏的损伤，其机制可能是通过抑制脑死亡后NF-κB的过度表达从而降低炎症介质的释放发挥对肾脏的保护作用。

论文目录

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• 论文部分
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• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述部分
• 综述
• 参考文献
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• 致谢