论文摘要
肿瘤目前仍是临床难以治疗的疾病之一,对人类的健康有很大危害,现在临床治疗肿瘤的主要方法是手术、化疗、放疗,给病人带来生存希望的同时也给病人带来较大创伤。化疗、放疗副作用较大,使病人恢复的较慢,多年来众多学者一直在寻找有效治疗恶性肿瘤的药物,尤其是筛选高效、低毒、低成本的天然药物,倍受生物学和医学界的关注。本文研究的主要对象—翅鳞伞[Pholiota squarrosa(Per.ex Fr.)]AS5.245,属于担子菌亚门(Basidiom ycotina),层菌纲(Hymenomycete),伞菌目(Agaricales),球盖菇科(Strophariaceae),鳞伞属[Pholiota(Fr.)kumm.]。目前国内外关于翅鳞伞AS5.245研究的报道几乎还是空白,本文在前期实验的基础上,以翅鳞伞为材料,利用各种层析技术对其活性物质进行了分离纯化,并对其活性进行了研究。1:本研究参考稻瘟霉模型活性追踪方法,筛选出水稻纹枯菌为指示菌的活性追踪方法。通过水稻纹枯菌活性追踪及MTT方法,发现抑制菌丝体生长和抑制癌细胞增殖之间存在一定关系,可以利用抑制水稻纹枯菌丝体生长的方法,对翅鳞伞中抑制肺癌细胞增殖的活性物质做初步筛选。2:应用硫酸铵沉淀、活性炭吸附和离子交换层析等现代层析分离技术,得到了电泳纯的蛋白,并进一步对翅鳞伞蛋白抑制水稻纹枯病菌丝体生长和其抑制癌细胞增殖活性进行研究,结果表明翅鳞伞蛋白可以显著抑制肺癌细胞A549的增殖。翅鳞伞菌丝体蛋白可明显抑制体外培养的肺癌细胞(A549)的增殖。翅鳞伞菌丝体蛋白含量达到20μg/mL时,对肺癌细胞(A549)的抑制率可达65%以上。3:利用jc-1检测试剂盒来检测线粒体跨膜电位,实验表明活性蛋白可使肺癌细胞线粒体跨膜电位的下降,再利用TUNEL检测试剂盒可检测到,一部分肺癌细胞经诱导产生3’OH末端,被荧光素标记。4:通过研究发现蛋白具有对质粒PUC18单一的内切酶酶切位点。
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摘要Abstract缩写符号第一章 文献综述1 食药用真菌的研究进展2 核糖体失活蛋白2.1 蓖麻蛋白(Ricin)2.2 天花粉蛋白(TCS)2.3 核糖体失活蛋白的作用机理3 在蕈菌中发现的具有抗肿瘤活性的蛋白4 肿瘤细胞凋亡的研究进展5 细胞坏死5.1 引起细胞坏死的原因5.2 细胞坏死机制5.3 坏死的调控对于治疗的意义6 常用的检测细胞方法细胞6.1 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜检测法6.2 线粒体膜势能的检测6.3 TUNEL法7 抗肿瘤细胞增殖筛选的方法7.1 分子水平筛选模型7.2 细胞水平筛选模型7.3 疾病动物模型、转基因和基因敲除动物模型8 本研究的目的参考文献第二章 翅鳞伞AS5.245蛋白的生物学活性研究1 材料和方法1.1 材料和试剂1.2 试剂配制和培养基2 实验方法2.1 翅鳞伞发酵培养2.2 翅鳞伞[Pholiota squarrosa]胞外蛋白液制备2.3 翅鳞伞[Pholiota squarrosa]发酵菌丝体提取液的制备2.4 硫酸铵沉淀法翅鳞伞发酵产物中的蛋白2.5 透析2.6 活性液浓缩2.7 翅鳞伞胞内、胞外蛋白对真菌毒力测定2.8 细胞复苏2.9 细胞传代2.10 翅鳞伞蛋白抑制人肺癌细胞株(A549)增殖的体外实验2.11 翅鳞伞蛋白作用人肺癌细胞株(A549)的形态学观察3 结果与讨论3.1 翅鳞伞蛋白对不同菌株的毒力测定3.2 翅鳞伞蛋白抑制人肺癌细胞株(A549)体外抑制增殖实验3.3 翅鳞伞蛋白作用人肺癌细胞株(A549)形态学观察4 本章小结参考文献第三章 翅鳞伞胞内抗肿瘤蛋白的分离纯化1 材料和方法1.1 主要实验材料1.2 方法2 结果与讨论2.1 活性炭吸附预处理蛋白2.2 DEAE-Sephaeel柱层析2.3 SephadexG-100柱层析2.4 蛋白质电泳2.5 蛋白分子量测定2.6 硫酸-蒽酮法鉴定蛋白2.7 PSPB-2蛋白抗真菌活性及其对肺癌细胞作用的形态学观察3 本章小结参考文献第四章 PSPB-2抑制肺癌细胞(A549)的作用机理及其生物学活性的探讨1 材料和方法1.1 材料1.2 试剂1.3 常用溶液1.4 仪器2.方法2.1 A549细胞培养2.2 抑制A549细胞增殖的体外实验2.3 A549细胞的形态学观察2.4 细胞的线粒体膜电位的检测2.5 TUNEL法检测凋亡2.6 PSPB-2的核酸内切酶作用的研究3 结果与讨论3.1 PSPB-2抑制A549细胞增殖的体外实验3.2 激光共聚焦扫描显微镜对A549细胞的形态学观察3.3 细胞的线粒体膜电位的检测3.4 TUNEL法检测凋亡3.5 核酸内切酶作用4 本章小结参考文献全文结论全文创新点致谢攻读硕士期间发表论文
相关论文文献
- [1].翅鳞伞AS5.245胞内粗多糖抗肿瘤作用的研究[J]. 食品科学 2008(12)
标签:食药用真菌论文; 翅鳞伞论文; 抗增殖论文; 细胞活性论文; 分离纯化论文; 核酸内切酶论文; 凋亡论文;
翅鳞伞(Pholiota squarrosa)AS5.245胞内蛋白PSPB-2的分离纯化及其生物学活性的研究
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