青枯雷尔氏菌致病力分化的细菌色谱表征

论文摘要

青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）是引起植物细菌性青枯病害的病原菌。青枯雷尔氏菌在寄主范围、地域分布、致病性和生理生化特征等方面均有很大差异。本文利用高效液相离子交换色谱体系,研究了不同致病力不同地域不同寄主的青枯雷尔氏菌的色谱特性,建立了不同来源青枯雷尔氏菌的特征色谱。研究转座子EZ-Tn5TM插入致弱青枯雷尔氏菌的色谱特性、突变菌株在番茄植株的定殖特性、生防效果以及生防效果和色谱特性之间的相关性,构建青枯雷尔氏菌无致病力突变菌株的色谱效价指数,探讨建立色谱效价作为植物疫苗防效评价的指标,从而为筛选高效稳定的植物疫苗作为生防制剂提供标准。主要研究内容及结果如下：1、青枯雷尔氏菌的弱化指数小于0.65为强致病力菌株,弱化指数介于0.65-0.75为过渡型菌株,弱化指数大于0.75为无致病力菌株。本研究测定了71株不同来源青枯雷尔氏菌的弱化指数,供试的71株青枯雷尔氏菌分为3类,其中29株强致病力菌株,8株过渡型菌株,34株无致病力菌株。2、优化了青枯雷尔氏菌的色谱分离及表征的条件：（1）设定不同PH（6.0、7.0、8.0、9.0）,分析不同PH条件下,平衡和洗脱缓冲液对样品色谱特性的影响；（2）设定不同进样量（10μL、20μL、30μL、40μL、50μL）,分析不同进样量对色谱特性的影响。确定PH为7.0,进样量为20μL是青枯雷尔氏菌色谱分析的最佳条件3、以青枯雷尔氏菌FJAT-91和FJAT-145的色谱特性作为标准,表征了71株不同来源不同致病力青枯雷尔氏菌的色谱特性,将这71株菌分为3类。第1类,在1 min出现单一的特征峰；第2类,在1min和8min都出现特征峰；第3类,在1min、8min和17min都出现特征峰。不同致病力菌株的特征峰在峰型以及保留时间上有差别。4、比较29株EZ-Tn5TTM插入的致弱青枯雷尔氏菌的定殖特性和防治效果,构建突变菌株的色谱效价指数,分析色谱效价和防效之间的相关性。结果表明,29株突变菌株均能在番茄盆栽苗上定殖,定殖时间最长20 d,菌株T871的定殖效果最好,接种后第20d,定殖量为2.8×104 cfu/gFW,菌株T713和T831对番茄青枯病的防效最好,均达91.7%。通过相关性分析得出色谱效价（X1）和生防效果（X2）之间呈正相关的关系,其相关系数为0.60。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1.1 前言
• 1.2 青枯雷尔氏菌的致病机理以及致病力分化
• 1.3 高效液相色谱在细菌上的应用
• 1.3.1 高效液相色谱在细菌识别上的应用
• 1.3.2 高效液相色谱在青枯雷尔氏菌上的应用
• 1.4 青枯病的防治研究进展
• 1.4.1 化学防治
• 1.4.2 生物防治
• 1.5 本文研究目的和意义
• 第二章 青枯雷尔氏菌致病力分化
• 2.1 前言
• 2.2 材料及方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 青枯雷尔氏菌弱化指数的测定
• 2.3.2 基于弱化指数的青枯雷尔氏菌聚类分析
• 2.4 讨论
• 第三章 青枯雷尔氏菌细菌色谱条件确立
• 3.1 前言
• 3.2 材料及方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 方法
• 3.2.2.1 青枯雷尔氏菌色谱分析的影响因素
• 3.2.2.2 青枯雷尔氏菌色谱分析条件的确立
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 缓冲液对青枯雷尔氏菌活力的影响
• 3.3.2 青枯雷尔氏菌色谱分析条件的确立
• 3.3.3 色谱条件的确立
• 3.4 讨论
• 第四章 青枯雷尔氏菌致病性分化细菌色谱表征及特征图谱的建立
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 青枯雷尔氏菌的色谱表征
• 4.2.2.1 不同致病力的青枯雷尔氏菌的色谱表征
• 4.2.2.2 青枯雷尔氏菌FJAT-91和FJAT-1458的色谱表征
• TM转座子插入系列青枯雷尔氏菌的色谱表征'>4.2.2.3 EZ-Tn5^TM转座子插入系列青枯雷尔氏菌的色谱表征
• 4.2.2.4 不同寄主的青枯雷尔氏菌的色谱表征
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 青枯雷尔氏菌FJAT-91和FJAT-1458的色谱表征
• 4.3.2 不同致病力青枯雷尔氏菌细菌色谱表征
• TM转座子插入青枯雷尔氏菌的色谱表征及特征色谱图库的建立'>4.3.3 EZ-Tn5^TM转座子插入青枯雷尔氏菌的色谱表征及特征色谱图库的建立
• 4.3.4 不同寄主中青枯雷尔氏菌的色谱表征及特征色谱图库的建立
• 4.3.4.1 花生植株中青枯雷尔氏菌的色谱表征及特征色谱图库的建立
• 4.3.4.2 辣椒植株中青枯雷尔氏菌的细菌色谱表征及特征色谱图库的建立
• 4.3.4.3 茄子植株中青枯雷尔氏菌的色谱表征及特征色谱图库的建立
• 4.3.4.4 番茄植株中青枯雷尔氏菌的色谱表征及特征色谱图库的建立
• 4.4 讨论
• 第五章 植物疫苗工程菌青枯雷尔氏菌色谱效价检测标准的构建及病害防效的研究
• 5.1 前言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 材料
• 5.2.2 方法
• 5.2.2.1 番茄植株的培养
• 5.2.2.2 青枯雷尔氏菌菌悬液的制备
• TM插入青枯雷尔氏菌在番茄植株内定殖数量'>5.2.2.3 EZ-Tn5^TM插入青枯雷尔氏菌在番茄植株内定殖数量
• 5.2.2.4 植株体内青枯雷尔氏菌的分离
• TM插入青枯雷尔氏菌的灌根处理'>5.2.2.5 EZ-Tn5^TM插入青枯雷尔氏菌的灌根处理
• TM插入青枯雷尔氏菌的防效评价'>5.2.2.6 EZ-Tn5^TM插入青枯雷尔氏菌的防效评价
• 5.2.2.7 无致病力青枯雷尔氏菌色谱效价的构建
• 5.3 结果与分析
• TM插入青枯雷尔氏菌在番茄植株内定殖数量'>5.3.1 EZ-Tn5^TM插入青枯雷尔氏菌在番茄植株内定殖数量
• TM插入青枯雷尔氏菌的生物防效实验'>5.3.2 EZ-Tn5^TM插入青枯雷尔氏菌的生物防效实验
• 5.3.3 无致病力青枯雷尔氏菌植物疫苗色谱效价与病害防效的相互关系
• 5.4 讨论
• 结论和展望
• 结论
• 展望
• 参考文献
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 个人简历