呼吸道感染儿童呼吸道合胞病毒及人偏肺病毒感染的研究

论文摘要

第一部分呼吸道感染患儿中呼吸道合胞病毒感染状况的研究目的了解呼吸道感染患儿中呼吸道合胞病毒的感染状况以及分子流行病学的基本情况。方法采集2006年11月-2007年4月新疆自治区人民医院儿科门诊及住院急性呼吸道感染患儿咽拭子280份,呼吸道分泌物112份。其中112份呼吸道分泌物标本进行直接免疫荧光检查。然后对全部标本提取核酸,逆转录合成cDNA,巢氏PCR扩增RSV的G基因片段。随机选取阳性结果5份,进行测序。与GenBank中一些代表株进行序列比对、同源性比较并绘制基因进化树。结果直接免疫荧光结果:112份呼吸道分泌物中呼吸道合胞病毒抗原阳性结果占27.6%（31/112）,其它病毒抗原占10.7%（12/112）,混和感染占2.7%（3/112）。巢氏PCR结果:392份样本中共检出RSV阳性标本68份,占17.3%（68/392）,其中A基因型64份,占93.3%（64/68）,B基因型4份,占6.7%（4/68）。用配对卡方检验比较直接免疫荧光和巢氏PCR两种检测方法,结果P>0.05,一致性分析kappa值=0.587。测序的5株新疆呼吸道合胞病毒与其他国家及地区代表株之间的同源性为63.6-99.4%,进化树显示它们被分为A、B两型及若干亚型。结论1.呼吸道合胞病毒是本地区2006年-2007年冬春季小儿呼吸道感染中的最主要病毒。2.A型呼吸道合胞病毒为2006年-2007年冬春季流行的的主要基因型。3.A、B两型呼吸道合胞病毒可以共存于一个流行季节。第二部分呼吸道感染患儿中人偏肺病毒感染状况的研究目的了解偏肺病毒是否是乌鲁木齐地区小儿呼吸道感染的病毒病原之一。与呼吸道合胞病毒是否存在合并感染的情况。方法选取标本方法和数量同第一部分,提取核酸及逆转录合成cDNA方法同第一部分,选取人偏肺病毒的M基因片段做为目的基因进行PCR扩增。阳性结果测序并与GenBank中一些人偏肺病毒的代表株进行序列比对、同源性分析并绘制基因进化树。结果392例样本中共检出阳性标本2例,占总样本0.5%（2/392）,测序结果表明扩增产物确为人偏肺病毒的M基因片段,与其它代表株的同源性为83.5%-99.3%,绘制基因进化树结果表明它们可能分属于不同的基因亚型。结论1.偏肺病毒是乌鲁木齐地区的小儿呼吸道感染的病毒病原体之一,2.在同一流行季节可同时存在两种不同基因型的人偏肺病毒的流行。3.本研究样本中不存在人偏肺病毒与呼吸道合胞病毒的混合感染。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 小儿呼吸道合胞病毒的感染状况的研究
• 1.目的
• 2.材料
• 实验方法
• 1. 标本采集
• 1.1 咽拭子采集
• 1.2 呼吸道分泌物采集
• 2. 直接免疫荧光检测七种病毒
• 3. 提取病毒总RNA、逆转录合成cDNA
• 3.1 病毒总RNA 的提取
• 3.2 逆转录合成cDNA
• 3.3 PCR 扩增目的基因（采用巢氏PCR 方法）
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 小儿偏肺病毒感染状况的研究
• 1.目的
• 2.材料
• 实验方法
• 1. 标本采集
• 2. 病毒核酸抽提及逆转录合成cDNA 同第一部分
• 3. PCR 扩增目的基因
• 3.1 引物设计
• 3.2 PCR 反应体系及条件
• 3.3 PCR 产物的鉴定
• 3.4 测序
• 3.5 同源性比较及绘制基因进化树
• 结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 导师评阅表