论文摘要
研究目的:后发障是现代白内障术后最常见的并发症,后发障的发病机制至今尚未完全明确。上皮间质转分化是后发障发生过程中主的要病理改变,转化生长因子β（TGF-β）作为间质转分化最有力的诱导因子,在后发障发病过程中发挥重要作用。阻断TGF-β诱导的间质转分化的生物学过程为后发障的防治提供了新的思路。结缔组织生长因子（CTGF）是一种在纤维化过程中起重要作用的间质细胞生长因子,近年来CTGF在TGF-β诱导的一系列生物学过程,特别是间质转分化过程中的作用受到重视。本课题旨在总结以往研究TGF-β与后发障相关研究的基础上,采用siRNA干扰这一高效、特异的基因沉默手段抑制体外培养的人晶状体上皮细胞CTGF的表达,观察基因干扰对TGF-β2诱导的上皮间质转分化的影响,分析TGF-β2和CTGF在晶状体上皮细胞间质转分化过程中的作用及信号转导机制,进一步明确后发障的发病机制,为基因治疗后发障提供靶标。研究方法:采用体外培养的人晶状体上皮细胞株HLE B-3,用不同浓度的TGF-β2处理细胞,应用免疫印迹法及RT-PCR观察细胞CTGF表达及间质转分化相关蛋白connexin43、a-SMA表达的影响。建立后发障离体研究模型,采用脂质体介导的siRNA干扰技术转染HLE B-3细胞,特异性沉默CTGF的表达。应用免疫印迹、免疫荧光等方法观察CTGF基因干扰对TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞间质转分化及粘附功能的影响。研究结果:TGF-β2能够诱导体外培养人晶状体上皮细胞表达CTGF蛋白,CTGF在晶状体上皮细胞内的表达主要位于细胞浆。外源性TGF-β2及CTGF均能诱导人晶状体上皮细胞发生间质转分化。siRNA干扰能够成功的从基因和蛋白水平抑制TGF-β2诱导的人晶状体上皮细胞CTGF的表达,并且能够抑制TGF-β2诱导的人晶状上皮细胞间质转分化和粘附作用及相关蛋白的表达。研究结论:CTGF作为TGF-β2的下游分子,在TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞的间质转分化过程中发挥关键作用。基因干扰CTGF的表达能够抑制TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞间质转分化,为后发障的防治提供理论依据。
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