新型稀土络合物BC-EDTA的制备、表征及纳米颗粒标记用于时间分辨免疫检测

论文摘要

本文主要围绕超灵敏诊断技术的研究展开。时间分辨荧光免疫诊断（TRFIA）以及生物发光免疫诊断技术是现代免疫诊断方法中两个引人注目的热点领域,适合于临床上微量抗原、抗体的检测和病原微生物痕量检测等。本论文选题在这两个研究方向开展相关的研究工作。全文主要包括三个部分:综述各种类型的高灵敏免疫检测技术;新型稀土络合物2,9-双[N,N-双（羧甲基）氨甲基]-4,7-（苯基）-1,10-（菲咯啉）（BC-EDTA）的合成及其标记二氧化硅纳米生颗粒并运用于时间分辨荧光免疫诊断。第一章为绪论,介绍了各种类型的超灵敏免疫检测技术,并简要介绍超灵敏检测技术发展的最新成果。第二章主要为稀土络合物BC-EDTA的制备与表征。首先合成了一种新型稀土络合物BC-EDTA,该螯合剂具有良好的水溶性,可与稀土金属离子(Eu3+)形成强荧光络合物,不需要加入增强液,且与铕离子形成的络合物荧光强度十分稳定。利用四极杆飞行时间质谱、红外吸收光谱、紫外吸收光谱和核磁共振氢谱对其进行表征,结果表明,我们合成的络合物与设计完全一致。第三章描述了利用稀土络合物BC-EDTA标记二氧化硅纳米应用于时间分辨荧光免疫检测。将纳米荧光材料制备技术与时间分辨荧光免疫测定法相结合,建立了以荧光纳米颗粒为生物标记物的高灵敏度时间分辨荧光免疫分析方法。利用油包水型（W/O）微乳液体系,通过优化乳液中各组分的配比和氨水的量来控制纳米颗粒的大小和四乙氧基硅烷的水合化、聚合速度,得到了直径为55 nm左右的空二氧化硅纳米颗粒,再加入（APTMS）,室温反应2h,引入氨基。稀土螯合剂BC-EDTA与碳二亚胺（EDC）、（NHS）室温搅拌下反应30 min,与悬浮于pH为6.8的磷酸盐缓冲液中的颗粒反应2 h,在加入Eu离子敏化发光,重复此过程4次,制得时间分辨荧光纳米颗粒。再在荧光纳米颗粒表面引入氨基,可以与抗体、抗原、寡核糖核苷酸等生物大分子交联。这种荧光纳米作为生物标记物在免疫检测,细胞成像及DNA杂化等领域将具有广阔的应用空间。我们采用双抗体夹心法对人血清中乙肝表面抗原（HBsAg）进行了检测。检测灵敏度为65pg/mL,远远高于传统的ELISA 200pg/mL的灵敏度,并且其变异系数（CV）控制在20%以内。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 绪论
• §1.1 课题研究的背景及意义
• §1.2 高灵敏检测技术发展状况
• §1.2.1 荧光免疫检测技术
• §1.2.2 生物发光免疫检测技术
• §1.2.3 免疫PCR检测技术
• §1.3 本论文研究内容及设计思路
• 参考文献
• 第二章 新型稀土络合物BC-EDTA的制备与表征
• 第一节 引言
• 第二节 新型稀土络合物BC-EDTA的制备与表征及其荧光性能的研究
• §2.1 材料与方法
• §2.1.1 试剂
• §2.1.2 仪器
• §2.1.3 新型稀土络合物BC-EDTA合成
• §2.1.4 BC-EDTA的表征
• §2.2 结果与讨论
• §2.2.1 BC-EDTA对稀土离子的敏化发光
• 3+的荧光寿命'>§2.2.2 BC-EDTA-Eu³⁺的荧光寿命
• §2.2.3 pH值对荧光强度的影响
• 第三节 小结
• 参考文献
• 第三章 BC-EDTA修饰二氧化硅纳米颗粒应用于时间分辨免疫检测
• 第一节 引言
• 第二节 复合荧光纳米颗粒的制备与表征
• §2.1 材料与方法
• §2.1.1 试剂
• §2.1.2 仪器
• §2.1.3 二氧化硅纳米颗粒的制备
• §2.1.4 BC-EDTA修饰二氧化硅纳米颗粒
• §2.1.5 抗HBSAg-IgG与氨基化荧光纳米颗粒的偶联
• §2.1.6 复合荧光纳米颗粒的表征
• §2.1.7 基于荧光纳米颗粒的时间分辨免疫分析
• §2.2 结果与讨论
• §2.2.1 荧光纳米颗粒的制备
• §2.2.2 荧光纳米颗粒的光谱性质
• §2.2.3 荧光纳米颗粒的荧光寿命
• §2.2.4 抗体与荧光纳米颗粒的偶联
• §2.2.5 基于荧光纳米颗粒夹心型免疫分析HBsAg
• 第四节 讨论
• 参考文献
• 第四章 基于二氧化硅纳米颗粒和生物素化虫荧光素酶的生物发光免疫检测
• 第一节 引言
• 第二节 基因重组表达生物素化日本萤火虫荧光素酶的及生物发光免疫检测
• 参考文献
• 附录:硕士期间发表论文
• 致谢