61株鸭源鸡杆菌部分耐药基因及其与耐药性关系的研究

论文摘要

本试验对临床分离的61株鸭源鸡杆菌进行了耐药性的调查,并在此基础上对部分耐药基因进行了研究,同时分析了耐药基因同耐药性之间的关系。对61株鸭源鸡杆菌利用K-B法进行了14种常见抗生素的药敏试验,结果发现这些菌株总体上对环丙沙星、克林霉素、青霉素、诺氟沙星、卡那霉素、链霉素的耐药性很高,耐药率分别为83.61%（51/61）、93.44%（57/61）、86.89%（53/61）、93.44%（57/61）、80.33%（49/61）、88.52%（54/61）;所有受试菌株对庆大霉素、妥布霉素、头孢曲松、头孢吡肟、利福平高度敏感,敏感菌株分别达到了78.69%（48/61）、55.74%（34/61）、70.49%（43/61）、80.33%（49/61）、60.66%（37/61）。多重耐药现象很严重,同时耐受七、八、九、十种抗生素的菌株数目最多,占总菌株数的73.77%（45/61）,耐受十一种以上抗生素的菌株数目占8.2%（5/61）,其中还出现了一株对所试14种抗生素全部耐药的菌株。对61株鸭源鸡杆菌利用PCR方法进行了卡那霉素相关耐药基因aphA、aadB、aac（6’）-Ih、aac（3）-Ia、aac（3）-Ⅱa的检测,结果只有aphA、aadB、aac（3）-Ⅱa基因检测出阳性,检出率分别为77.05%（47/61）、31.15%（19/61）和14.75%（9/61）,aphA基因的检出率要远高于另外两种基因,分析这些基因同卡那霉素的耐药表型后发现,在49株卡那霉素耐药菌株中,具有aphA、aadB、aac（3）-Ⅱa基因的菌株分别占89.80%（44/49）、36.73%（18/49）、18.37%（9/49）,因此可以判断,在鸭源鸡杆菌中,卡那霉素抗性主要由aphA基因决定。对61株鸭源鸡杆菌利用PCR方法进行了三类经典整合酶基因的检测,结果从61株鸭源鸡杆菌中检测到intI1阳性菌株19株,占总菌株数的31.15%,intI2和intI3未被检测到,说明Ⅰ类整合子在鸭源鸡杆菌中的存在率较高;对检测到的intI1基因进行测序后在NCBI的Blastn中进行同源性比较,发现同多数细菌intI1基因的同源性均为100%,其中包括大肠杆菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌等,说明鸭源鸡杆菌中的intI1基因也是经典的Ⅰ类整合酶基因,其功能并未发生变化;对intI1基因进行了初步定位,确定了其在鸭源鸡杆菌的质粒上肯定存在;将61株鸭源鸡杆菌分为intI1阳性和阴性组,并利用统计学方法对其同耐药性之间的关系做了分析,结果显示:除头孢曲松、头孢吡肟、利福平外,其余的11种药物在Ⅰ类整合酶阳性组的耐药率要高于阴性组,具有统计学意义,证明鸭源鸡杆菌对抗生素的耐药性同Ⅰ类整合子的存在有关,即具有整合子的菌株易产生耐药性,且更易产生多重耐药性,Ⅰ类整合酶阳性组的耐药性基本上都在8种以上,而阴性组多数都在5种以下。对19株intI1阳性的菌株进行了整合子可变区的检测及分析,结果有18株细菌检测到可变区的存在,1株检测阴性。共检测到5种不同的耐药基因盒,大小分别为3000多bp、1821bp、1600bp、1007bp、744bp,除3000多bp基因盒未测序成功外,其他四种包含的耐药基因组合分别为aadB-PSE-1、aadB-aadA1、aadA2、aadB,这些基因介导细菌对卡那霉素、β-内酰胺类抗生素、链霉素、壮观霉素的抗性。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 文献综述
• 1 鸡杆菌概述
• 1.1 鸡杆菌分类地位的确立
• 1.2 鸡杆菌的微生物学特性
• 1.3 鸡杆菌的致病性
• 2 鸡杆菌相关耐药性及耐药基因的研究进展
• 3 氨基糖苷类抗生素耐药基因的研究进展
• 3.1 氨基糖苷类抗生素概述
• 3.2 常见氨基糖苷类钝化酶
• 3.3 临床关于氨基糖苷类耐药基因与耐药性关系的研究
• 4 整合子基因盒系统与细菌多重耐药的研究进展
• 4.1 整合子基因盒系统的结构
• 4.2 整合子基因盒系统的分类及分布
• 4.3 整合子对基因盒的捕获和表达
• 4.4 整合子基因盒系统与细菌多重耐药的关系
• 试验一 61 株鸭源鸡杆菌对部分抗生素耐药性的检测
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 试验二 61 株鸭源鸡杆菌分离株卡那霉素相关耐药基因的检测及分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 卡那霉素相关耐药基因的检测
• 2.2 卡那霉素相关耐药基因与耐药性的关系
• 3 讨论
• 试验三 61 株鸭源鸡杆菌三种类型整合酶基因的检测及定位
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 intI1 基因的 PCR 检测
• 2.2 intI2、intI3 基因的 PCR 检测
• 2.3 intI1 基因检测结果阳性的鸭源鸡杆菌质粒的提取
• 2.4 intI1 基因的定位
• 2.5 Ⅰ类整合酶同耐药性的关系
• 3 讨论
• 试验四 鸭源鸡杆菌I 类整合子耐药基因盒的检测及其与多重耐药性关系的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 I 类整合子可变区基因的PCR
• 2.2 I 类整合子可变区的序列分析
• 2.3 I 类整合子可变区PCR 产物的RFLP 分析
• 3 讨论
• 参考文献
• Abstract