三七皂苷及其单体配伍对内皮细胞功能、单核—内皮黏附的影响与机制研究

论文摘要

动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是多种心血管疾病的共同病理基础,严重威胁着人们的健康。研究表明血管内皮损伤是AS发生的先决条件及重要机制。氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）作为AS发生的独立的危险因素之一,可引起血管内膜损伤,诱导各种黏附分子的表达,从而促进单核细胞与动脉内膜的黏附、迁移并吞噬脂质成为泡沫细胞,这些病理变化在人类动脉粥样硬化发生和发展中起到非常关键的作用。因此,保护内皮、抑制单核-内皮细胞黏附是AS防治的一个关键环节。临床及实验研究证明,三七总皂苷（total saponisns of Panax notoginseng, PNS）作为三七的主要有效成分,对多种心血管疾病均有良好的防治作用,且安全无明显毒副作用。我室研究也表明,PNS可以有效防治动脉粥样硬化的发生发展。目前已从PNS中分离并鉴别到20余种单体成分,根据其皂单元的不同,分为三醇型和二醇型。在PNS的复杂成分中,到底是哪些单体分子在发挥作用,它们之间的相互关系如何?迄今为止,尚未见有关单体间相互作用的研究。考虑到PNS具有明确的抗动脉粥样硬化作用、而内皮在动脉粥样硬化进程中起着至关重要的作用,本实验拟从AS发病关键环节内皮损伤及单核细胞与血管内皮细胞黏附入手,旨在研究PNS抗动脉粥样硬化的作用机理,深入阐明PNS抗AS的物质基础,为寻找有效的抗AS药靶组合及中药配伍机理的研究开辟新的领域。方法1.采用酶消化法体外原代培养脐静脉内皮细胞（HUVEC,human umbilical vein endothelial cells）,以形态学观察和Ⅷ因子免疫荧光法进行鉴定。2.ox-LDL处理HUVEC造成损伤,通过形态学观察、MTT测定细胞活性、检测细胞上清液中LDH释放量,硝酸还原酶法和放射免疫法测定HUVEC培养上清液中NO、ET含量,观察不同浓度PNS对HUVEC损伤的保护作用。3.ox-LDL处理HUVEC后,加入人单核株THP-1与HUVEC共培养1h,通过形态学观察THP-1与HUVEC黏附,采用蛋白染料染色法测定黏附值,观察不同浓度PNS及三七皂苷单体对ox-LDL诱导的单核-内皮细胞黏附的抑制作用。4.正交实验设计三七皂苷单体配伍组合,通过单核-内皮细胞黏附实验筛选最佳单体配伍组合。5.RT-PCR方法测定ICAM-1的mRNA表达;Western-blot方法测定ICAM-1蛋白表达。结果1.ox-LDL（100μg/ml）可导致细胞损伤,可见细胞间隙增宽,细胞收缩,胞膜皱缩,边界不清,折光性降低,部分细胞脱落,细胞活性明显下降。PNS不同浓度均可改善ox-LDL的损伤,提高细胞存活率（P<0.01）。2.PNS各剂量组与ox-LDL组相比,均能显著降低LDH的释放（P<0.01）。3.PNS高剂量组可使HUVEC培养上清液中NO含量升高,ET含量降低,与ox-LDL组比较有显著性差异。NO在中剂量有显著性差异（P<0.01）,低剂量无显著性差异。ET在PNS低、中剂量变化不明显。4.ox-LDL组单核细胞的黏附率显著增加（P<0.01）,PNS对其具有明显的剂量依赖性抑制作用。5.正交实验表明,三七皂苷单体Rg1、Rb1、R1是PNS中影响单核-内皮细胞的黏附的三个主要因素,且三者之间存在着交互作用,最佳单体配伍组合是:Rg1（10-5mol/L）、Rb1（10-4mol/L）、R1（10-5mol/L）。6.ox-LDL组与正常对照组相比,ICAM-1 mRNA及蛋白表达水平显著上调（P<0.01）,PNS各剂量组及单体组合组均能下调ICAM-1 mRNA及蛋白表达。结论1.ox-LDL（100μg/ml）可造成HUVEC结构和功能损伤。PNS对ox-LDL导致的血管内皮细胞损伤有保护作用,并能调节内皮细胞NO、ET分泌,保护内皮细胞的功能。2.PNS可能通过下调ICAM-1 mRNA及蛋白的表达而抑制单核细胞与血管内皮细胞的黏附,提示PNS抑制由单核细胞向动脉内膜的迁移,进而阻断泡沫细胞及AS斑块形成,是其发挥防治AS的重要机制所在。3.在本实验体系中,保护血管内皮、抑制单核-内皮黏附的最佳PNS单体组合为:Rg1 :Rb1 :R1为1:10:1（Rg1 10-5mol/L、Rb1 10-4mol/L、R1 10-5mol/L）,此最佳单体组合能显著下调ICAM-1的表达,是PNS防治AS的重要物质基础。

论文目录

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• 论文正文三七皂苷及其单体配伍对内皮细胞功能、单核一内皮黏附的影响与机制研究
• 前言
• 第一部分 三七皂苷对ox-LDL 损伤血管内皮细胞的保护作用
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 三七皂苷及其单体配伍对单核-内皮细胞黏附的影响及机制研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 全文结论
• 致谢
• 照片
• 参考文献
• 文献综述 内皮损伤及黏附分子在动脉粥样硬化中的作用
• 参考文献
• 在读硕士期间发表的文章