论文摘要
背景：据统计，骨折病人中大约有5％-10％会出现延迟愈合或骨不愈合。如何促进骨折愈合，减少骨不连及骨延迟愈合发生率一直是创伤骨科面临的重要课题。目前在骨不连的治疗上自体骨移植是促进骨愈合的金标准，但自体骨移植也存在不少的并发症，例如：多手术部位及切口引起的肢体承重状态和功能的下降、失血增多、手术时间延长、发生骨折及感染风险增加和疼痛。况且，自体骨移植也并不能保证一定会使骨折愈合。这些都使我们有必要从分子和细胞水平上对骨形成进行更深入的了解，以便找到更好的方法促进骨愈合。骨折的自然愈合过程一般分为五个阶段，包括：对损伤的速发性反应、膜内骨形成、软骨形成、软骨内骨化和骨的重塑。在骨折愈合过程中大量的生长因子、细胞因子以及它们的受体在骨折处周围呈现较高水平，这些蛋白中有些在骨组织中表达，有些则由损伤周围的炎性细胞释放，所以有理由相信它们在骨折的愈合过程中起着重要的作用。现多种生长因子（例如：BMPs、TGF—β、IGFs、FGFs等）已经被鉴别并证实在间充质细胞分化成骨原细胞和骨形成中起着重要的作用。创伤病人大多骨折的同时会伴有肌肉损伤，在众多的生长因子中，胰岛素样生长因子-1除了能直接诱导软骨细胞、成骨细胞成骨外，还可以促进成肌细胞的分化与增殖，提高损伤肌肉的愈合质量。但由于胰岛素样生长因子-1代谢半衰期短，直接注射需要因子作用浓度高，且需多次反复注射，价格昂贵，可行性不高；利用载体直接缓释工GF-1，存在着随时间的延长释放量下降，很难维持有效剂量。随着基因治疗的研究发展，将转有胰岛素样生长因子-1基因的细胞移植入损伤区，达到该基因在体内的持续表达已可行，并可解决以上难题。目的：观察携带外源人胰岛素样生长因子-1（human insulin—like growth factor-1，hIGF—1）基因的成肌细胞体内局部多点注射对C57BL／6J小鼠胫骨骨折愈合的影响，为利用转hIGF—1基因的成肌细胞治疗骨折提供理论和实验依据。材料和方法：8周龄雄性C57BL／6J小鼠42只，体重22～25g，用2％戊巴比妥钠，30mg／kg，行腹腔内注射麻醉后，以定点手法折骨术建立左胫骨中段闭合骨折的动物模型，随机分成两组：实验组和对照组。分别在实验组和对照组骨折周围肌肉组织中多点注射O．3ml转基因成肌细胞悬液（约含3×106个BrdU标记的成肌细胞）或等量生理盐水，术后于第2、3、4周每组各处死7只，骨痂行HE染色，观察形成骨痂面积的大小和组成成分的变化。术后第2、4周曾注射转hIGF-1基因成肌细胞和生理盐水的肌肉行BrdU和hIGF-1免疫组织化学染色分析外源性细胞在体内有无存活并表达hIGF-1，并用HMIAS-2000高清析度彩色医学图文分析系统对IGF—1蛋白表达进行半定量检测，其结果以平均灰度值表示，平均灰度值低示表达水平高；左胫骨行x线摄片以观察骨折愈合情况；骨痂采用透射电镜观察生长情况。结果：各实验组转基因成肌细胞BrdU和hIGF-1免疫组化染色均阳性，各对照组BrdU和hIGF-1免疫组化染色均阴性，4周实验组平均灰度值虽稍高于2周实验组，但经独立样本t检验P＞0．05，差异无显著性；所有实验组外骨痂中小梁骨占骨痂总面积的百分比均高于对照组，其中第3、4周经F检验两组的差异具有显著性（P＜0．05）；x线显示第4周实验组有较多骨痂形成，经秩和检验与对照组有显著差异（P＜0．05）；电镜显示实验组骨生成细胞的数量、活跃程度和胶原纤维的数量、分布均优于对照组。结论：1、携hIGF-1基因的成肌细胞移植入C57BL／6J小鼠胫骨骨折处周围肌肉中可存活4周以上，并能稳定地分泌hIGF-1；2、局部注射转hIGF-1基因的成肌细胞可以促进C57BL／6．J小鼠胫骨骨折的愈合；3、我们推测局部注射的转hIGF-1基因成肌细胞可能是通过内分泌和（或）旁分泌提高C57BL／6J小鼠血清和（或）骨折局部的IGF-1浓度从而达到促进胫骨骨折愈合的作用。
论文目录
相关论文文献
- [1].成肌细胞介导的hIGF-1基因转移促骨折愈合实验研究[J]. 现代医院 2008(03)
- [2].hIGF-1基因治疗老龄大鼠勃起功能障碍的剂量及时效研究[J]. 中华男科学杂志 2008(08)
- [3].hIGF-1基因改良修饰人脐血间充质细胞的研究[J]. 中华老年骨科与康复电子杂志 2018(06)
- [4].钴金属螯合亲和层析在hIGF-1融合蛋白分离纯化中的应用[J]. 药物生物技术 2013(03)
- [5].hIGF-1促进软骨细胞在脱细胞软骨基质材料中的增殖及黏附[J]. 基础医学与临床 2019(10)
- [6].hIGF-1转基因促周围神经再生和抑制肌肉萎缩的实验研究[J]. 中国实验诊断学 2010(06)
- [7].hIGF-1基因转染促进退变椎间盘Ⅱ型胶原的表达[J]. 中国矫形外科杂志 2008(05)
- [8].转染hIGF-1基因增强兔退变椎间盘蛋白多糖的表达[J]. 基础医学与临床 2008(08)
标签：胰岛素样生长因子论文; 成肌细胞论文; 骨折愈合论文; 小鼠论文;