乳腺导管增生性病变和浸润性乳腺癌MTDH蛋白表达及SNP筛选的研究

论文摘要

目的：观察乳腺普通型增生（usual ductal hyperplasia, UDH）、不典型增生（atypical ductal hyperplasia, ADH）、原位癌（ductal carcinoma in situ, DCIS）及浸润癌（invasive breast carcinoma, IBC）中MTDH的表达,探讨MTDH在乳腺疾病发生进展过程中的作用。并筛选MTDH基因新的功能性多态位点,探讨其与乳腺癌的关系。方法：本实验采用免疫组织化学SP三步法检测80例乳腺导管内增生性病变,162例浸润性乳腺癌和7例正常乳腺组织标本中MTDH的表达。提取65例乳腺癌和60例正常健康人血液基因组DNA,利用PCR扩增和直接测序法,筛选出新的SNP位点。用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析。结果：1.免疫组化染色结果显示,在增生性病变中,MTDH蛋白高表达率分别为UDH24.14%（7/29）, ADH 28.57%（4/14）, DCIS 72.97%（27/37）,在正常组织中,MTDH的表达率为0%（0／7）,而在浸润性乳腺癌中其高表达率为55.56%（90／162）。统计分析,从正常乳腺组织到导管内增生性病变再到浸润性癌的发展过程中,MTDH蛋白的表达有逐渐升高趋势,统计学分析有显著性差异P<0.001)。2.在DCIS中,MTDH的高表达与细胞增殖指标Ki67高表达相关（P=0.008）,在低级别导管内癌MTDH的高表达率为59.09%（13／22）,而在高级别导管内癌MTDH的高表达率为93.33%（14／15）,两者差异有统计学意义（P=0.028）。3.在浸润性乳腺癌中,MTDH的高表达分别与患者的年龄（P=0.042）、Ki67增殖指数（P=0.036）、ER表达状态（P=0.018）和P53表达状态（P=0.001）相关,差异有统计学意义（P<0.05）。结果显示MDTH高表达的乳腺癌患者较年轻,Ki67增值指数高,ER阴性表达,P53高表达。4.PCR扩增和直接测序法结果显示（SNP位点筛选）,在MTDH基因5’上游区和外显子12的3’UTR区发现多处SNP位点,包括-470G>A、-200 G>A、2928C>T、3088A>G、3540T>C。MTDH外显子12的3’UTR区的3个SNP位点（2928C>T、3088A>G、3540T>C）之间均处于完美连锁不平衡状态,D’=1,r2=1。在我们的研究人群中只检测到2个单倍型,C2928A3088T3540（野生型）和T2928G3088C3540（突变型）。5.乳腺癌患者组与正常对照组之间,5个SNPs位点的基因型和等位基因频率分布均无统计学差异（P>0.05）。结论：1.在正常乳腺组织,MTDH蛋白不表达或者低表达,但是从普通型增生、不典型增生到导管原位癌,MTDH的表达强度和水平逐渐增高。研究结果表明MTDH可能在乳腺导管内增生性病变的发生进展中发挥一定作用。在导管内癌中MTDH蛋白表达水平比浸润性乳腺癌高,表明MTDH可能在乳腺癌发生的起始阶段中起重要作用。2.MTDH在高增殖活性的浸润性乳腺癌和DCIS病例中高表达,MTDH过表达与细胞高增殖活性相关。3.在UDH、ADH和DCIS中,MTDH蛋白的表达强度和阳性率不同。在UDH和ADH, MTDH蛋白表达强度及表达率均低于高级别导管内癌,说明MTDH可能在正常细胞到肿瘤细胞的转化过程中起一定作用。4.在浸润性乳腺癌中,MTDH高表达的患者发病年龄低、ER阴性、P53过表达和Ki67高表达,提示MTDH是一个临床预后不良的指标。5.在筛选出的MTDH基因5个新的SNP位点中,未发现与乳腺癌易感性相关的位点。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 实验材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况表