论文摘要
目的:口腔颌面部肿瘤是头颈部肿瘤的重要组成部分。在我国80%以上的口腔颌面部恶性肿瘤是鳞状细胞癌(简称鳞癌),采用手术、放疗、化疗等传统的方法仍难根治,复发率高,而且位于重要部位的肿瘤不适合切除,预后差,为改善治疗效果,人们进行了许多有益的探索,尝试了一些新的方法,以期获得更佳的效果。如果能采用生物治疗的方法,控制早期癌变的发展,延长晚期癌病患者的生存质量并延长生存时间,尽量减少手术切除组织的范围,对于口腔癌患者来说不啻为一种福音。作为已知的人体内抗原呈递功能最强的专职抗原呈递细胞——树突细胞,现已具备了进行体外分离、扩增、与培养的成熟技术,各种形式的DC肿瘤疫苗的研究已成为当前肿瘤治疗的一大热点。近年来,随着DC的功能和生物学特性被不断认识,DC在肿瘤免疫、移植免疫和抗感染免疫等方面日益受到人们的重视,被运用于B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、前列腺癌、转移性肾癌和多发性骨髓瘤等恶性肿瘤的临床尝试性治疗,并取得了令人鼓舞的疗效。在众多的DC瘤苗方案中,肿瘤细胞与DC融合得到细胞融合疫苗以及基于树突状细胞( dendritic cells, DC)的疫苗方案由于其明确的治疗效果而受到广泛重视。本实验采用重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),重组人白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),诱导培养健康人外周血单核细胞获得成熟DC,以Tca8113人舌黏膜鳞状细胞癌细胞冻融抗原致敏DC制备瘤苗。观察其对荷瘤裸鼠的抑瘤作用,来探讨树突状细胞疫苗用于口腔鳞癌患者免疫治疗的可行性。方法:取健康志愿者抗凝外周血20ml,常规分离外周血单核细胞(peripheral blood monocytes,PBMC),用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液调整细胞浓度为1×107个/ml,然后接种于6孔板,每孔3 ml。5%CO2, 37℃条件下孵育23h后,吸出培养上清,用预热的培养基清洗板1次,以去除非贴壁细胞(冻存),获得贴壁的单核细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4( rhIL-4)、重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)协同诱导人外周血单核细胞成为成熟DC。Tca83舌癌细胞可溶性抗原体外致敏DC,将同源人T淋巴细胞与之共同培养诱导出抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs),共同接种至荷瘤裸鼠体内行免疫治疗。结果:人外周血单核细胞在细胞因子协同诱导下可获得功能正常的DC,用致敏DC+CTLs免疫治疗的荷瘤裸鼠与对照组相比,实验组肿瘤生长速度减慢,实验结束时(第21天)肿瘤体积明显小于对照组,明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。绘制两组裸鼠肿瘤生长曲线,对照组肿瘤生长曲线较陡,上升幅度较大,实验组肿瘤生长曲线呈缓慢下降趋势。实验结束时实验组的抑瘤率为26.16%,与对照组行配对t检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:采用舌鳞癌肿瘤细胞冻融抗原体外致敏DC,诱导产生肿瘤抗原特异性CTLs具有显著的抑瘤效应,实验证明,DC瘤苗治疗舌鳞状细胞癌是可行的,有望成为口腔肿瘤免疫治疗的新途径。
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