芽孢杆菌A7株体外降解饲料蛋白及饲喂建鲤效果的研究

论文摘要

益生菌（Probiotics）是一种可制备成包含一定数量、成分明确的微生态制剂或产品。使用后能改善宿主肠道菌群生态平衡和增强机体的非特异性免疫功能,降低肠道疾病的发生率和间接促进动物生长,并能提高饲料的转化率,最终达到增重、增强免疫力和提高饲料利用率的作用。本试验结合传统的细菌学鉴定和16SrDNA序列分析法确定了本实验室从建鲤肠道分离的一株益生芽孢杆菌A7株的分类地位,并研究了A7菌株的最佳固体发酵条件、体外发酵降解饲料蛋白的效果以及饲喂建鲤的效果。根据文献合成保守性通用引物,对A7的16SrDNA进行扩增和目标片段测序,将测序结果与NCBI上进行相似性比较,运用生物学软件clustalxl.81和Mega4.0进行发育树的构建,并结合常规的细菌学鉴定结果,最终确定A7为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。采用单因子试验设计对固体发酵培养基进行优化试验,确定了A7的最佳固体发酵条件为：料水比1：1,接种量5%,温度28℃,容量比16%。按照上述最佳固体发酵条件发酵固体培养基制作菌粉,菌粉活菌数达1.0×109cfu/mLc。采用正交试验设计,对A7株体外发酵降解饲料原料（豆粕、菜粕和玉米）中的蛋白的作用进行了研究。结果表明,A7株降解豆粕、菜粕和玉米蛋白的最佳温度分别为：28℃、30℃和25℃；最佳接种量都为5%；最佳料水比分别为：1：1.2、1：0.8和1：1.2；最佳发酵时间分别为：72h、72h和48h。正交试验设计中,经发酵降解后,试验组中豆粕、菜粕和玉米的水解度（DH）分别为：20.92%、7.12%和8.81%,分别比对照组提高12.68%、2.95%和3.81%；试验组中豆粕、菜粕和玉米的平均肽链长度（ALPC）分别为：11.86、38.11和11.47,分别比降解前缩短48.83%、25.09%和3.61%。动物试验结果表明：饲料中添加比例为0.5%、1.0%和1.5%枯草芽孢杆菌A7株试验组的建鲤增重率比对照组分别提高25.60%、69.07%和36.03%,添加市售枯草芽孢杆菌菌粉试验组建鲤增重率比对照组提高15.07%；肝胰脏淀粉酶、肠道蛋白酶和淀粉酶的活力比对照组分别提高2.05%-11.49%、10.52%-31.44%和3.94%～9.82%（P<0.05）。其中,添加量为1.0%A7株的试验组饵料系数最低,为1.55,比对照组降低32.90%（P<0.05）,饵料蛋白质效率比对照组提高48.55%（P<0.05）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1.前言
• 1.1 益生菌概述
• 1.2 枯草芽孢杆菌的特点
• 1.3 枯草芽孢杆菌的作用机制
• 1.3.1 微生物夺氧及竞争作用
• 1.3.2 拮抗病原菌
• 1.3.3 提供营养物质和产生酶类
• 1.3.4 增强机体的免疫机能
• 1.3.5 净化水体
• 1.4 枯草芽孢杆菌的研究进展
• 1.4.1 应用研究进展
• 1.4.2 酶系的研究进展
• 1.4.3 其他方面的研究
• 1.5 影响枯草芽孢杆菌制剂使用效果的因素
• 1.6 目前使用枯草芽孢杆菌制剂存在的问题
• 1.7 枯草芽孢杆菌制剂研究前景
• 1.8 本试验的目的与意义
• 2. 试验材料
• 2.1 试验菌株、饲料原料及试验动物
• 2.2 日粮
• 2.3 主要试剂
• 2.4 主要培养基
• 2.5 主要仪器设备
• 3. 试验方法
• 3.1 枯草芽孢杆菌A7株的鉴定
• 3.1.1 细菌学鉴定
• 3.1.2 A7菌株16SrDNA分子鉴定
• 3.2 A7菌株固体发酵条件的优化
• 3.3 菌株体外降解鱼饲料蛋白作用的研究
• 3.3.1 试验设计
• 3.3.2 蛋白质水解度的测定
• 3.3.3 平均肽链的测定
• 3.4 A7菌粉的制作
• 3.5 市售枯草芽孢杆菌菌粉
• 3.6 动物试验
• 3.6.1 试验动物的选择和管理
• 3.6.2 试验条件与饲养管理
• 3.6.3 相关指标的测定
• 4. 试验结果
• 4.1 菌株的鉴定
• 4.1.1 菌株的生理生化鉴定结果
• 4.1.2 菌株的16SrDNA分子鉴定结果
• 4.2 菌株固体发酵条件的优化结果
• 4.3 菌株体外降解饲料蛋白的作用
• 4.3.1 体外发酵豆粕
• 4.3.2 体外发酵菜粕
• 4.3.3 体外发酵玉米粉
• 4.3.4 方差分析
• 4.4 动物试验结果
• 4.4.1 生长性能
• 4.4.2 消化酶活力
• 4.4.3 肌肉营养成分
• 5. 讨论
• 5.1 A7菌株的鉴定
• 5.2 固体发酵条件的优化
• 5.3 体外降解饲料蛋白作用
• 5.3.1 体外发酵豆粕
• 5.3.2 体外发酵菜籽粕
• 5.3.3 体外发酵玉米粉
• 5.4 动物试验
• 5.4.1 对建鲤生长性能的影响
• 5.4.2 对建鲤消化功能的影响
• 5.4.3 对建鲤肌肉组成成分的影响
• 6. 结论
• 参考文献
• 致谢