论文摘要
背景与目的：骨肉瘤是一种好发于青少年的恶性骨肿瘤,易发生肺转移,是骨肉瘤患者治疗失败的一个最主要的原因。探讨miR-21在骨肉瘤和正常骨组织中的表达并分析其与临床病理之间的联系。方法：我们通过实时定量PCR方法检测42例骨肉瘤组织（包括8例来自同一患者的原发骨肉瘤组织和转移肿瘤组织）和来自同一患者的邻近正常骨组织中miR-21的表达并根据临床资料评估miR-21的临床相关性；我们利用Western blot和实时定量PCR方法检测了8例原发肿瘤组织和周围正常骨组织中RECK的表达,并分析其与miR-21表达的联系。结果：miR-21在所有的组织中都有表达,且在肿瘤组织中比在正常骨组织中有明显的高表达（P=0.013）,此外,miR-21在转移的肿瘤组织中比在同一样本中的原发肿瘤组织中高表达（P=0.002）。然而miR-21表达与性别,年龄,病变部位,肿瘤大小,分型和分期无关（P>0.05）。研究还发现RECK在组织中均有表达,但是RECK蛋白的表达在正常骨组织中比在对应的肿瘤组织中高表达,而RECK mRNA表达在两者中无明显差异,统计分析发现RECK蛋白的表达和miR-21表达之间存在显著的负相关（r=-0.892,P<0.001）。结论：在本研究中我们第一次发现相对于周围相邻的正常骨组织来说,miR-21在骨肉瘤组织中呈明显过表达,说明miR-21高表达可以作为骨肉瘤一个诊断指标；且miR-21在转移肿瘤组织中比在原发肿瘤组织中高表达,预示miR-21高表达潜在的导致肿瘤转移,其可以作为骨肉瘤患者预后的一个指标；RECK蛋白与miR-21表达的负相关也许意味着RECK是miR-21的一个调控靶点,miR-21可通过调节RECK的表达而影响肿瘤转移。背景与目的：微小RNA（microRNA, miRNA）是一类内源性的非编码小分子RNA,其主要通过与靶mRNA作用抑制转录后的翻译。miR-21是唯一一个在9种人类肿瘤细胞中高表达的小RNA分子。本研究旨在观察anti-miR-21反义寡核苷酸（ASO）或是过表达质粒对miR-21表达干扰后对骨肉瘤MG-63细胞增殖,凋亡,侵袭和转移的影响。方法：构建miR-21 ASO和miR-21过表达真核表达质粒并通过转染骨肉瘤细胞株MG-63,利用实时荧光定量RT-PCR检测MG-63细胞中miR-21的表达变化,利用Western blot和实时定量PCR方法检测了细胞中RECK的表达；并运用多种细胞增殖检测方法观察MG-63细胞增殖能力；流式细胞术检测MG-63细胞的凋亡率变化；Transwell细胞侵袭实验观察对MG-63细胞侵袭能力的影响；划横实验检测MG-63细胞迁移能力,并在体检测miR-21 ASO对骨肉瘤细胞增殖能力的影响。结果：经证实成功构建表达质粒；实时荧光定量RT-PCR证实miR-21 ASO转染组miR-21表达明显减低,而miR-21过表达真核表达质粒组miR-21表达显著上调。研究发现miR-21 ASO转染组MG-63细胞增殖能力明显低于对照；相反miR-21过表达组细胞增殖能力明显增强（P<0.05）；miR-21ASO转染组MG-63细胞的凋亡较对照增加,相反miR-21过表达组细胞凋亡减少（P<0.05）；与对照相比,miR-21 ASO组穿膜细胞数和迁移细胞的数量显著减少,相反的现象出现在miR-21过表达组（P<0.05）；而且在调控miR-21的表达时,RECK蛋白与miR-21的表达呈明显的负相关,此外报告基因载体证实miR-21能直接作用于RECK3’-UTR。在体实验结果发现miR-21 ASO抑制肿瘤细胞增殖,导致肿瘤质量较对照轻（P=0.013）,形成的体积较对照小（P=0.028）。结论：上调miR-21表达可促进细胞增殖,侵袭和转移,抑制细胞凋亡；而利用miR-21 ASO抑制miR-21表达则能抑制进细胞增殖,侵袭和转移,促进细胞凋亡；RECK作为miR-21的一个靶点,miR-21能影响肿瘤细胞生物学行为也许就是通过调节RECK的表达实现的；miR-21作为骨肉瘤一个促癌基因,利用反义核酸技术可为骨肉瘤的基因治疗开辟新的径路。