苍耳素Ⅲ-1杀菌活性成分的分离鉴定及可湿性粉剂的加工研究

论文摘要

苍耳素Ⅲ-1是从植物苍耳中提取分离出的抑菌活性物质,对番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers.）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium Schl.）、黄瓜黑星病菌（ Cladosporium cucumerinum Ell. et Arthur）和番茄早疫病菌（Alternaric solani（Ellis et Martin）Jones et Grout）等蔬菜常见病害有较强的抑制作用。本文对苍耳素Ⅲ-1中的抑菌成分进一步分离纯化及鉴定,获得苍耳素Ⅲ-1活性物质的化学结构式。通过对制剂助剂的筛选研究,确定制剂配方中最佳填料、分散剂、润湿剂及其制剂最佳配比,加工得到25%苍耳素Ⅲ-1可湿性粉剂,并进行了质量检测和室内药效评价。研究结果如下:1.以黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium Schl.）为供试菌,采用柱层析和薄层层析的方法对苍耳素Ⅲ-1中抑菌成分的进行分离和纯化,对分离的各流分进行抑菌活性的测定,选取抑菌活性较高的流分再进行薄层层析法分离及生物测定,据苍耳素Ⅲ-1抑菌活性较高流分的TLC分离的结果,选取苍耳素Ⅲ-1高活性流分5号,10号进行抑菌成分的GC-MS分析,主要抑菌成分有呋喃甲醛（2-Furancarboxaldehyde）;5-羟甲基糠醛（5-Hydroxymethyl-2-furaldehyde）,4-羟基-4-甲基-2-戊酮（Diacetone alcohol）等。2.以黄瓜黑星病菌（ Cladosporium cucumerinum Ell. et Arthur）和黄瓜黑星病菌（Alternaric solani（Ellis et Martin）Jones et Grout）为供试菌,测定了活性成分呋喃甲醛、4-羟基-4-甲基-2-戊酮、苍耳素Ⅲ-1对供试菌的抑菌活性,结果表明:苍耳素Ⅲ-1对黄瓜黑星病菌和番茄早疫病菌的菌丝生长抑制的毒力最高,其EC50分别为0.00052mg/mL和0.0104mg/mL;呋喃甲醛、4-羟基-4-甲基-2-戊酮的抑制率都达到了90%以上,具有良好的抑菌效果;苍耳素Ⅲ-1的抑菌率为98.1%,说明苍耳素Ⅲ-1的抑菌作用主要是其含有的抑菌物质作用的结果,而不是溶剂在起主要抑菌作用。3.对苍耳素Ⅲ-1进行剂型研究,筛选并确定剂型配方中的助剂及其最佳配比。25%苍耳素Ⅲ-1可湿性粉剂配方为苍耳素Ⅲ-125%;白炭黑63%;分散剂甲基萘磺酸钠甲醛缩合物（MF）10%;润湿剂十二烷基苯磺酸钠（ABS）2.0%。4. 25%苍耳素Ⅲ-1可湿性粉剂进行了质量评价,pH值为8.59;润湿时间为45s;悬浮率（%）为83.8;细度（通过325目筛）（m/m）为99.2;起泡性8 mL,各项指标均达到国家标准,热/冷储后无结块、不发粘,能自由流动,润湿性和悬浮率良好。5. 25%苍耳素Ⅲ-1可湿性粉剂在5mg/ mL对番茄早疫病菌菌菌丝生长的最高抑制作用为65.22%,对黄瓜黑星病菌菌丝生长的最高抑制作用为70.20%; 25%苍耳素Ⅲ-1WP100倍对番茄灰霉病的保护作用和治疗作用分别为54.08%和55.09%, 25%苍耳素Ⅲ-1WP200倍、400倍、800倍对番茄灰霉病的保护作用和治疗作用依次降低,均高于对照丙酮的防效。

论文目录

• 摘要
• SUMMARY
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 国内外植物源杀菌剂研究历史及现状
• 1.1.1 国外植物源杀菌剂研究进展
• 1.1.2 国内植物源杀菌剂研究进展
• 1.2 植物源杀菌剂资源的筛选研究
• 1.3 植物源杀菌活性物质研究
• 1.3.1 植物源杀菌活性成分
• 1.3.2 植物源杀菌活性成分的开发与应用
• 1.4 植物源杀菌剂的作用机理
• 1.5 植物源农药的剂型加工研究
• 1.6 苍耳的开发与应用
• 1.6.1 苍耳属的生物学特性
• 1.6.2 苍耳属中的主要化学成分及生物活性
• 1.6.3 苍耳的抑菌作用、作用机理研究
• 1.7 植物源农药研究存在问题
• 1.8 本论文的研究内容与目的
• 第二章 苍耳素Ⅲ-1 的分离纯化及鉴定
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 供试菌种
• 2.1.2 供试苍耳提取物
• 2.1.3 主要仪器及试剂
• 2.1.4 试验方法
• 2.1.4.1 苍耳提取物中抑菌成份的分离
• 2.1.4.2 装柱
• 2.1.4.3 柱层析法的分离
• 2.1.4.4 各流分抑菌活性的测定
• 2.1.4.5 抑菌活性较高流分的薄层层析法分离
• 2.1.4.6 抑菌物质的生物测定方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 各流分不同时间段对黄瓜枯萎病菌的生物活性
• 2.2.2 苍耳素Ⅲ-1 抑菌活性较高流分的薄层层析分离的Rf 值
• 2.2.3 苍耳素Ⅲ-1 高活性流分抑菌成分的GC-MS 分析
• 2.2.4 抑菌活性成分的生物测定
• 2.2.4.1 抑菌活性成分对黄瓜黑星病菌菌丝生长的抑制作用
• 2.2.4.2 抑菌活性成分对番茄早疫病菌菌丝生长的抑制作用
• 2.3 结论与讨论
• 第三章 苍耳素Ⅲ-1 可湿性粉剂助剂及配方筛选
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 供试材料
• 3.1.2 主要仪器及药剂
• 3.1.3 试验方法
• 3.1.3.1 载体的筛选方法
• 3.1.3.2 润湿剂的选择方法
• 3.1.3.3 分散剂的筛选
• 3.1.4 苍耳素Ⅲ-1 可湿性粉剂加工方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 载体的筛选结果
• 3.2.2 润湿剂及最佳配比筛选结果
• 3.2.3 分散剂及最佳配比的筛选
• 3.2.4 25%苍耳素Ⅲ-1 可湿性粉剂加工结果
• 3.3 讨论
• 第四章 25%苍耳素Ⅲ-1 可湿性粉剂的质量检测
• 4.1 材料
• 4.1.1 供试药品
• 4.1.2 仪器与用品
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 pH 值测定方法
• 4.2.2 可湿性粉剂细度测定方法
• 4.2.3 起泡性的测定方法
• 4.2.4 润湿性的检测方法
• 4.2.5 悬浮率的检测方法
• 4.2.6 制剂的冷贮稳定性检测方法
• 4.2.7 制剂的热贮稳定性检测方法
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 pH 值测定结果
• 4.3.2 可湿性粉剂细度测定结果
• 4.3.3 起泡性的测定结果
• 4.3.4 润湿性的检测结果
• 4.3.5 悬浮率的检测结果
• 4.3.6 制剂的冷/热贮稳定性检测结果
• 4.4 结论与讨论
• 第五章 25%苍耳素Ⅲ-1 可湿性粉剂药效评价
• 5.1 材料方法
• 5.1.1 供试材料
• 5.1.2 试验方法
• 5.1.2.1 离体活性测定方法
• 5.1.2.2 黄瓜子叶法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 离体活性测定结果
• 5.2.2 25%苍耳素Ⅲ-1WP 对番茄灰霉病药效测定结果（黄瓜子叶法）
• 5.3 讨论
• 第六章 主要结论与讨论
• 第一节 主要结论
• 第二节 问题与讨论
• 第三节 创新性
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介
• 导师简介