鸡补体C3部分生物学特性的研究

论文摘要

补体是动物体液中重要的免疫物质,由40多种蛋白质组成,广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面,是具有精密调控机制的蛋白质反应系统,其活化过程表现为一系列丝氨酸蛋白酶的级联酶解反应。多种微生物成分、抗原-抗体复合物以及其他外源性和内源性的物质可通过3条途径（经典激活途径、旁路激活和途径MBL激活途径）激活补体,这3条途径以裂解C3形成C3b相互交叉,由C3b形成不同的C5转化酶（C4b2a3b、C3bBb）,激活补体C5开始共同的终末反应过程,最后形成膜攻击复合物（MAC）插入靶细胞,通过破坏靶细胞局部磷脂双层而形成渗漏斑,或形成穿膜的亲水性孔道,导致靶细胞崩解。可见补体C3是补体系统发挥免疫作用的关键分子。在以上理论的指导下,本课题对鸡补体C3的主要生物学特性进行了研究,探明了鸡体内补体C3的分子量、含量以及C3的作用、作用原理进行了研究.1.探明了鸡与哺乳动物对细菌性疫苗免疫效果不同的原因。在实验中,将O78大肠杆菌活化,扩大培养,以甲醛灭活,蜂胶为佐剂制备大肠杆菌颗粒性疫苗,免疫11日龄海蓝褐蛋用公雏,制备大肠杆菌抗血清;将大肠杆菌抗血清中的补体灭活,使之与已定数量的大肠杆菌反应,形成抗原抗体复合物,然后加入不同动物的新鲜血清,通过细菌计数,观察不同动物血清补体对大肠杆菌的清除能力;建立了微量血凝法测定动物血清补体效价,并对鸡和几种哺乳动物新鲜血清中的补体总活性进行测定。结果表明,单纯抗体与活菌结合后,对细菌的清除作用影响微弱,而加入补体后,抗体杀灭细菌的能力明显增强;经比较,哺乳动物血清中的补体对细菌的清除能力明显高于鸡;而豚鼠的补体的杀菌能力又明显高于其他哺乳动物;对不同动物血清补体总活性的测定结果表明,成年SPF鸡的补体总活性为25,低于兔、猪、牛、羊、豚鼠等哺乳动物,在这几种哺乳动物中,豚鼠的血清补体总活性为28。由此证明:不同动物体内补体活性的差异是哺乳动物和鸡对细菌性疫苗免疫效果不同的原因。2.抗鸡补体C3IgG的制备。按照鸡补体C3的α链上羧基端第1272位到1292位的21个氨基酸残基序列人工合成模拟C3分子的21肽,以戊二醛作为交联剂,与牛血清白蛋白载体偶联结合,制成人工合成抗原复合物。将此人工合成抗原与弗氏佐剂混合乳化成油乳剂疫苗免疫注射家兔,制备成抗21肽血清,并用硫酸铵沉淀法提取抗血清中的IgG;采用间接ELISA方法测定抗21肽血清和IgG的抗体效价。结果表明,人工合成的

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1 补体学的国内研究现状
• 2. 补体成分的分类
• 2.1 补体系统的固有成分
• 2.2 补体系统的调节因子
• 2.3 补体受体
• 2.4 补体活性片段
• 3 补体系统的激活
• 3.1 经典激活途径
• 3.2 替代激活途径
• 3.3 凝集素激活途径
• 4 补体 C3 国内外研究现状
• 4.1 C3b 的生物学结构
• 4.2 C3b 免疫机制
• 4.3 细菌荚膜对 C3b 免疫功能的影响
• 4.4 C3b 的调理作用
• 4.5 C3b 在抗原提呈中的作用
• 4.6 C3b 介导的细胞黏附作用
• 5 本研究的目的意义
• 试验一 不同动物血清补体对大肠杆菌清除能力的研究
• 1.1 材料与方法
• 78大肠杆菌'>1.1.1 O₇₈大肠杆菌
• 1.1.2 血清
• 1.1.3 海蓝褐蛋用公雏
• 1.1.4 试剂
• 1.1.5 仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 大肠杆菌抗体的制备
• 1.2.2 抗体存在条件下，不同动物血清补体对大肠杆菌的清除作用
• 1.2.3 不同动物血清补体活性的测定
• 1.2.4 各种动物血清中总补体活性测定
• 2. 结果
• 2.1 大肠杆菌抗体的制备
• 2.1.1 抗原无菌检验和安全性检查
• 2.1.2 平板凝集检验抗体的效价
• 2.2 不同动物补体对大肠杆菌的清除作用
• 2.3 不同动物血清中补体总活性
• 2.3.1 溶血素效价的测定
• 2.3.2 各种动物血清中总补体活性的测定
• 3 讨论
• 3.1 对鸡抗大肠杆菌抗血清中补体的灭活
• 3.2 不同动物血清补体对大肠杆菌的溶菌作用
• 3.3 不同动物血清中补体总活性
• 试验二 抗鸡补体 C3 抗体的制备
• 1 材料与方法
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 主要药品与试剂
• 1.3 试验材料
• 1.3.1 补体 C3α链的氨基端21 肽
• 1.3.2 血清
• 1.3.3 试验用动物
• 1.4 试剂配制
• 2.结果
• 2.1 兔抗鸡 C3 21 肽抗血清效价的测定
• 2.1.1 免疫兔血清的抗体效价
• 2.2 抗鸡 C3 21 肽 IgG 的提取及其效价的测定
• 2.3 抗鸡 C3 21 肽 IgG 纯度的测定
• 3.讨论与分析
• 3.1 C3 21 肽的合成
• 3.2 牛血清白蛋白-戊二醛-21 肽抗原的制备
• 3.3 间接 ELISA 方法测定抗体效价
• 试验三 鸡与哺乳动物补体活性与 C3 含量的比较
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要仪器设备
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 2.5%绵羊红细胞的制备
• 1.2.2 溶血素效价的测定
• 1.2.3 1.25%致敏绵羊红细胞的制备
• 1.2.4 各种动物血清中总补体活性测定（微量板溶血法）
• 1.2.5 抗鸡 C3 21 肽抗体的制备
• 1.2.6 抗鸡 C3 21 肽抗体工作浓度的确定
• 1.2.7 C3 含量标准曲线的绘制
• 1.2.8 鸡与各种哺乳动物血清补体 C3 含量的测定
• 2. 结果与分析
• 2.1 溶血素效价的测定
• 2.2 各种动物血清中总补体活性的测定
• 2.3 兔抗鸡 C3 21 肽 IgG 抗体工作浓度的确定
• 2.4 溶液中 C3 含量与 OD 值关系的标准曲线
• 2.5 不同动物血清中补体 C3 的含量
• 3. 讨论
• 3.1 微量板溶血法测定动物血清补体的效价
• 3.2 补体总活性与动物的抗病力
• 试验四 兔抗鸡 C3b 抗体的制备
• 1. 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 试验仪器
• 1.1.2 试验材料
• 1.1.3 试验药品
• 1.1.4 试剂配制
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 抗原的制备
• 1.2.2 动物的免疫
• 1.2.3 C3b 抗体的检测
• 1.2.4 免疫血清效价的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 菊糖-C3b 提取效果的鉴定
• 2.2 兔抗鸡 C3b 抗体的检测
• 2.3 免疫血清效价的测定
• 2.4 兔抗鸡 C3bIgG 的提取
• 2.5 纯化的兔抗鸡 C3bIgG 的活性分析
• 2.6 兔抗鸡补体 C3b 纯化 IgG 效价的测定
• 3. 讨论
• 3.1 菊糖-C3b 抗原的制备
• 3.2 兔抗鸡 C3b 抗体的制备
• 3.3 兔抗鸡 C3b19G 的纯化
• 试验五 鸡体补体 C3b 成分的分离纯化研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 抗鸡 C3b 抗体的制备
• 1.2.2 样品的制备
• 1.2.3 亲和层析柱的制备
• 2. 结果与分析
• 2.1 层析流出液中 C3b 分析
• 2.2 C3b 纯度鉴定和分子量确定
• 3 讨论
• 3.1 C3b 的产生
• 3.2 具有亚稳态结合部位的 C3b
• 3.3 具有稳定结合部位的 C3b
• 试验六 补体 C3 对大肠杆菌疫苗的免疫增强作用研究
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 抗 C3 21 肽抗体
• 1.1.2 SPF 鸡血清及 SPF 鸡
• 1.1.3 菌株
• 1.1.4 新西兰白兔
• 1.1.5 1%致敏绵羊红细胞
• 1.1.6 主要试剂
• 1.2 C3 佐剂大肠杆菌疫苗的制备
• 1.3 C3 佐剂疫苗的作用效果试验
• 1.3.1 动物免疫注射及检样采取
• 1.3.2 抗体效价的检测
• 1.3.3 总补体活性测定
• 2 结果
• 2.1 不同佐剂疫苗的效果比较
• 2.2 疫苗注射对补体总活性的影响
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文情况