长裙竹荪抑菌活性物质的分离纯化与鉴定

论文摘要

长裙竹荪是珍贵的食药两用真菌,具有很强的抑菌作用,在天然防腐剂开发方面具有广阔的前景。本文以7种细菌、2种酵母菌和3种霉菌为供试菌,以长裙竹荪为原料,采用不同浓度的乙醇进行浸提,对其提取物的抑菌效果进行了对比；利用平板打孔法研究其对7种细菌的抑菌效果和最低抑制浓度(MIC)。其次,以提取量和抑菌效果为指标设计单因素试验,在单因素试验的基础上,设计二次通用旋转组合试验,依据回归分析确定提取工艺的最优参数。最后,通过硅胶柱层析、薄层层析和追踪性抑菌试验对粗提物进行分离纯化,用核磁共振进行鉴定,首次获得具有抗菌活性的单体化合物,为竹荪中天然抗菌物质的开发提供依据。取得的主要研究结果如下：1.长裙竹荪原料经预处理后,在不同浓度的乙醇下进行浸提,通过比较其抑菌效果,选取浓度为100%(v/v)的乙醇为提取剂。2.用平板打孔法测定粗提物对细菌、霉菌和酵母的抑菌效果,结果表明提取物对霉菌和酵母没有抑菌作用,对细菌抑菌作用显著。3.用平板打孔法、双倍稀释法、浓度梯度稀释法测定粗提物对7种细菌的最低抑菌浓度,结果表明粗提物对肠炎沙门氏菌、苏云金芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度最低,均为30mg/mL,说明长裙竹荪子实体中存在抑菌物质。4.通过单因素试验得到的合适提取条件为：提取时间2h,提取温度70℃,最适液固比25：1。同时进行了单因素的同步抑菌试验并建立了抑菌效果与提取量的相关性曲线,结果表明抑菌效果与提取量成正相关,因此在二次通用旋转组合试验中用提取量为指标代替抑菌效果来衡量抑菌物的提取效果。5.在单因素的基础上,采用三元二次通用旋转组合设计试验,得到了提取量同提取温度、提取时间、液固比的回归方程。通过对提取量回归方程的优化,确定提取量最高的提取工艺参数为：提取时间1.5h、提取温度72℃、液固比25：1。建立的回归模型达到极显著水平,可以用来分析和预测长裙竹荪抑菌物质的提取工艺。6.以抑菌直径为指标,通过萃取、3次不同流动相的硅胶柱层析、反相柱层析以及同步薄层层析,分离纯化后得到一个单体化合物。根据该化合物的核磁共振波谱数据确定该化合物为间苯三酚。7.平板打孔法、原位抑菌法、液体培养显微镜观察和半抑制浓度测定的结果表明该化合物对供试细菌有很强的抑制作用,其对肠炎沙门氏菌的半抑制浓度为51.58ng/mL,对巨大芽孢杆菌的半抑制浓度为83.06ng/mL。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 竹荪的形态特征、营养价值、药用价值及抑菌功能
• 1.1 竹荪的形态特征
• 1.2 竹荪的营养价值
• 1.3 竹荪的药用价值
• 1.4 竹荪抑菌功能的研究进展
• 2 微生物与食品腐败
• 2.1 食品腐败的原因
• 2.2 食品腐败微生物
• 2.3 食品腐败变质的危害
• 3 食品防腐剂
• 3.1 化学防腐剂
• 3.2 天然防腐剂
• 4 硅胶柱层析与薄层层析
• 4.1 硅胶柱层析
• 4.2 薄层层析
• 5 本课题研究的目的、意义和内容
• 5.1 本课题研究的目的
• 5.2 本课题研究的意义
• 5.3 本课题研究的内容
• 第二章 长裙竹荪提取物的抑菌效果研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1. 试验材料与主要试剂
• 2.2 供试菌株与培养基
• 2.3 试验主要仪器
• 2.4 试验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 乙醇浓度对提取率的影响
• 3.2 不同浓度的乙醇提取物的抑菌效果
• 3.3 长裙竹荪原料有无熏蒸对提取物抑菌效果的影响
• 3.4 竹荪粗提物对各个供试菌的抑菌效果
• 3.5 长裙竹荪乙醇粗提物对各个供试细菌最低抑菌浓度（MIC）的测定
• 4 本章小结
• 第三章 长裙竹荪抑菌物质乙醇提取工艺优化
• 1 引言
• 2 试验材料与方法
• 2.1 试验材料与主要试剂
• 2.2 供试细菌菌株与培养基
• 2.3 试验主要设备与仪器
• 2.4 试验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 提取温度对提取效果和抑菌效果的影响
• 3.2 液固比对提取效果和抑菌效果的影响
• 3.3 提取时间对提取效果和抑菌效果的影响
• 3.4 通用旋转组合优化提取工艺
• 4 本章小结
• 第四章 抑菌物质的分离纯化与鉴定
• 1 引言
• 2 试验材料与方法
• 2.1 试验材料与主要试剂
• 2.2 供试细菌与培养基
• 2.3 试验主要设备与仪器
• 2.4 试验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 萃取后各层固形物含量及抑菌效果
• 11-D₁16片段回收率及抑菌效果'>3.2 硅胶柱层析D₁1-D₁16片段回收率及抑菌效果
• 21-D₂16片段回收率及抑菌效果'>3.3 硅胶柱层析D₂1-D₂16片段回收率及抑菌效果
• 31-D₃10片段回收率及抑菌效果'>3.4 硅胶柱层析D₃1-D₃10片段回收率及抑菌效果
• 3.5 反相硅胶柱层析结果
• 3.6 硅胶柱层析制纯品
• 3.7 长裙竹荪抑菌物质的结构鉴定
• 3.8 化合物半抑制浓度的测定
• 3.9 化合物抑菌作用的显微镜观察
• 4 本章小结
• 第五章 结论与展望
• 1 结论
• 1.1 长裙竹荪粗提物的抑菌效果
• 1.2 长裙竹荪乙醇提取工艺优化
• 1.3 长裙竹荪粗提物的分离、纯化与鉴定
• 2 展望
• 参考文献
• 附录Ⅰ
• 致谢