两头尖多糖的初步研究

论文摘要

目的:通过对两头尖多糖的提取、分离纯化工艺、单糖组成及体外活性的研究,为进一步研究其化学结构、生物学活性及应用开发提供依据。方法:水提醇沉法提取两头尖多糖;通过比较Sevage法和酶解-Sevage法的去蛋白效果,选出适合于两头尖多糖的去蛋白工艺;通过对活性炭法和D941大孔树脂两种脱色方法的比较,确定两头尖多糖的最佳脱色方法;采用透析、分级醇沉及活性炭柱层析等分离方法得到两头尖多糖AP-Ⅰa、AP-Ⅱa～AP-Ⅱd等组分,用苯酚-硫酸法和硫酸-咔唑法测定各组分的多糖及糖醛酸含量,并用气相色谱法对各部分多糖的单糖组成种类进行了检测;将AP-Ⅰa进行红外光谱扫描,以初步判断其结构;运用MTT法对两头尖多糖各组分进行了体外抗肿瘤活性研究。结果:两头尖多糖最佳水提工艺条件为:料液比1:20,提取温度100℃,提取时间2h,最佳醇沉工艺为:醇沉浓度80%、醇沉2次,静置12小时;通过比较发现酶解-Sevage法是一种较好的去蛋白方法;通过对两种脱色方法的比较,确定脱色最佳方案为D941大孔树脂法;两头尖多糖AP-Ⅰa、AP-Ⅱa～AP-Ⅱd的多糖含量分别为: 86.79%、39.22%、39.98%、42.47%、41.08%,糖醛酸含量分别为:10.90%、7.38%、6.85%、8.61%、10.21%;通过气相色谱法分析各组分中单糖组成,结果显示:AP-Ⅰa和AP-Ⅱc中含鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖;AP-Ⅱa中含鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖,半乳糖;AP-Ⅱb中含鼠李糖、葡萄糖;AP-Ⅱd中含鼠李糖、木糖、岩藻糖、葡萄糖;对AP-Ⅰa的红外光谱结果进行初步分析,判断其为α-型和β-型端基差向异构共存的吡喃环多糖,且含有糖醛酸;MTT法对两头尖多糖各组分进行体外抗肿瘤活性研究的结果表明,两头尖多糖AP-Ⅰa、AP-Ⅱc对人宫颈癌细胞有一定的抗肿瘤活性,并有显著的量效关系。结论:通过正交试验得出两头尖多糖的最佳提取工艺,并确定酶解-Sevage法和D941大孔树脂法为其较好的纯化方法;将多糖进行初步分离,得到AP-Ⅰa、AP-Ⅱa～AP-Ⅱd等5个组分,MTT法结果表明:两头尖多糖AP-Ⅰa、AP-Ⅱc对人宫颈癌细胞有一定的抗肿瘤活性。上述研究结果,为进一步研究两头尖多糖的化学结构、生物学活性及应用开发奠定了基础。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词
• 前言
• 文献综述
• 1 两头尖的研究现状
• 2 多糖的化学结构及生物活性研究进展
• 实验研究
• 1 材料、试剂和仪器
• 1.1 材料
• 1.2 试剂与试药
• 1.3 仪器设备
• 2 两头尖多糖的提取工艺研究
• 2.1 两头尖多糖水提工艺研究
• 2.2 两头尖多糖醇沉工艺研究
• 2.3 讨论
• 3 两头尖多糖的分离纯化
• 3.1 两头尖多糖去蛋白方法优选
• 3.2 两头尖多糖脱色方法优选
• 3.3 两头尖多糖的初步分离
• 3.4 讨论
• 4 两头尖多糖的含量测定
• 4.1 苯酚-硫酸法测定多糖含量
• 4.2 硫酸-咔唑法测糖醛酸含量
• 5 气相色谱法测定两头尖多糖的单糖组成
• 5.1 样品处理
• 5.2 气相色谱条件
• 5.3 气相色谱实验结果
• 5.4 讨论
• 6 两头尖多糖（AP- Ⅰ a）的红外谱图分析
• 6.1 红外光谱扫描
• 6.2 实验结果
• 7.两头尖多糖的抗肿瘤活性初步研究
• 7.1 主要试剂及样品配置
• 7.2 实验方法
• 7.3 结果与分析
• 7.4 讨论
• 结语
• 致谢
• 参考文献