放疗对胶质瘤B7-H1及细胞免疫逃逸影响的研究

论文摘要

放疗是目前神经系统肿瘤尤其是胶质瘤的综合治疗手段之一，平均可延长病人6到8个月的生存时间，但是即使放疗,仍有超过90%的病人发生复发。胶质瘤细胞突破宿主本身的免疫监视机制在肿瘤的形成中起到非常重要的作用，但是胶质瘤放疗对肿瘤细胞固有的免疫逃逸行为有何种影响目前还不太清楚。近年来，在肿瘤细胞免疫逃逸与细胞表面分子方面研究较多的是共刺激分子B7家族，其中对B7-H1的研究是当前热点之一。B7-H1又称为程序性死亡配体，它的基因位于人类第9号染色体上，编码含有290个氨基酸的I型跨膜糖蛋白，包括胞外区、疏水区和胞浆区。目前已经证实B7-H1与其受体PD-1的结合可以在体外抑制T细胞的增值和某些细胞因子的分泌，在T细胞活化的过程中作为负性共刺激分子存在，其诱导细胞毒性T细胞凋亡的功能是介导肿瘤细胞进行免疫逃逸的重要机制。本次实验既是研究放疗对B7-H1阳性细胞免疫逃逸能力的影响，从而为将来靶向肿瘤细胞的放疗和免疫治疗积累有用的资料。本研究计划观察放疗对小鼠的GL261细胞系在体外情况下的功能学（包括细胞表面B7-H1分子的表达情况、对T细胞的杀伤能力）的影响，开展放疗和肿瘤细胞免疫学的相关初步研究。本次研究发现，GL261细胞系在体外长期培养情况下，几乎不表达B7-H1（表达率小于0.1%），而经过分别5GY和10GY的伽马射线照射后，在第12、24、48小时后，与对照组相比，B7-H1的表达率分别为5.8%、11.2%、11.6%和18.4%、4.3%和3.2%，较照射前有了明显的增加，而且在一定的时间内，随着时间的延长而出现表达率的增加，推测是由于不表达B7-H1的细胞大量死亡而致，而后B7-H1的表达再次降低。使用磁珠分选的方法，分选出表达B7-H1的细胞，进行杀伤实验，与GL261细胞系对比，发现致敏的T细胞的杀伤能力明显下降（P=0.006）。综合此次研究，我们发现放疗对B7-H1在肿瘤细胞中的表达率有重要影响，而且B7-H1在肿瘤细胞的免疫逃逸中，起到负性作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 放疗对小鼠GL261 细胞 B7-H1 表达率的影响
• 1
• 1.1 试剂与器材
• 1.2 GL261 细胞培养和干预
• 1.2.1 GL261 细胞培养方法
• 1.2.2 对 GL261 细胞的放射干预
• 1.3 B7-H1 表达水平的检测
• 1.3.1 流式细胞仪测定肿瘤细胞放疗前后表型的变化
• 1.3.2. western blot 法检测放疗前后 B7-H1 的变化水平
• 1.3.3 细胞爬片免疫荧光法检测放疗前后 B7-H1 的表达变化
• 2 统计学分析
• 3.实验结果
• 3.1
• 3.1.1 western blot 法检测放疗前后 B7-H1 的表达
• 3.1.2 免疫荧光法检测放射前后 B7-H1 的表达
• 3.1.3 流式细胞仪检测放疗前后 B7-H1 的表达
• 4. 结论
• 第二部分 B7-H1 对小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的影响
• 1
• 1.1 主要试剂和材料
• 1.2 DC 细胞的制备
• 1.3 效应 T 细胞的培养
• 1.4 流式细胞分选出 B7-H1 阳性和 B7-H1 阴性的细胞
• 2 统计学分析
• 3. 实验结果
• 4. 结论
• 讨论
• 参考文献
• 附录A 文献综述
• 参考文献
• 在学研究成果
• 致谢