论文摘要
构建猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2）强毒株05ZYH33二元信号转导系统2148hk/rr基因敲除突变体。构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为2148hk/rr编码基因上、下游同源序列的基因敲除质粒,通过同源重组筛选2148hk/rr编码基因敲除突变体。PCR分析和Southern杂交结果均显示2148hk/rr编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代,基因敲除突变体构建成功。筛选获得05ZYH33二元信号转导系统2148hk/rr基因敲除突变体△2148hk/rr,为阐明该调控系统在猪链球菌致病过程中的作用奠定了基础。首先选择不同品系小鼠对05ZYH33的易感性进行评估。将28日龄BALB/c及ICR品系小鼠各10只分别通过腹腔接种细菌菌液,每只1mL（约5×108CFU）。在接种14天内,BALB/c小鼠组全数死亡,ICR小鼠组有6只存活,提示BALB/c小鼠对05ZYH33更易感,可用于该菌毒力评估。为确定05ZYH33对BALB/c小鼠的半数致死量(LD50),将30只BALB/c小鼠随机分为6组,1-5组分别使用不同稀释度菌液腹腔接种,第6组注射相同体积的THS培养基作为阴性对照。结果显示,LD50为8.4×107CFU。本试验为猪链球菌致病机制的深入研究奠定基础。利用小鼠和仔猪两种动物模型评估二元信号转导系统2148hk/rr在05ZYH33致病过程中的作用。在小鼠模型中,将28日龄BALB/c小鼠30只随机分为3组。第1组通过腹腔接种05ZYH33稀释菌液,每只1mL,约5×108CFU细菌;第2组以相同方式接种△2148hk/rr稀释菌液;第3组注射相同体积的THS作为阴性对照。野毒组小鼠在2日内全部死亡,而突变组小鼠轻微发病,无死亡发生。仔猪模型中,将9只3周龄仔猪随机分为三组,第1和第2组分别静脉接种1mL（约108CFU）的野毒株和突变株菌液;第3组注射等体积的PBS作为阴性对照。接种2日内,野毒株和突变株两组仔猪全部死亡,对照组仔猪均未发病。动物试验提示2148hk/rr在猪链球菌对不同宿主动物的致病性作用存在显著差异,该调控系统在猪链球菌2型感染人致病过程中的作用值得探究。
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