论文摘要
目的：肝硬化是大多数肝脏疾病共同的终末期表现，但目前对其治疗手段有限。近期研究发现，间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有在体内、外分化成为肝细胞的潜能，输注MSCs具有减轻受损肝脏炎症反应、减少胶原沉积、促进组织塑型等功能：这些研究结果为治疗肝硬化提供了新的思路。本实验用介入技术将新西兰白兔的MSCs超选择性移植入门静脉分支内，观察MSCs在兔病理性肝脏（肝硬化）内的存活情况，评价该移植途径的可行性和安全性，观察移植MSCs对肝功能的影响，为临床应用提供参考依据。材料和方法：1．25只新西兰白兔，体重3±0.5kg，经皮下注射四氯化碳-橄榄油溶液制作肝硬化新西兰白兔模型；2．用密度梯度离心法和贴壁培养法分离纯化兔MSCs，BrdU标记；3．数字减影血管造影机（digital subtraction angiograpy，DSA）下将3F微导管超选择性插管插至门静脉二级分支，然后注入标记成功的MSCs；4．于移植前、后做血清肝功能检测（AST、ALT、TB、DB、TP、Alb），观察移植MSCs前、后的肝功能变化；于移植后3w取兔肝脏标本，荧光免疫组织化学染色检测移植细胞。结果：1．制作肝硬化动物模型结束后随机取实验动物肝脏标本，大体标本显示：肝脏较正常肝脏缩小，质地较硬，表面呈棕褐色；HE染色切片显示：肝细胞呈不同程度的浊肿变性、片状坏死，可见增生的纤维组织包绕假小叶。检测血清ALT明显升高（造模前为69.14±14.78U／L，造模后为144.44±53.20U／L），与造模前相比有统计学差异（t=6.539，p＜0.05），AST（43.48±15.08U／L比44.61±8.05U／L）、TB（21.27±6.48umol／L比20.28±4.75umol／L）、DB（11.84±2.80 umol／L比11.52±2.95umol／L）、TP（68.47±3.53g／L比68.22±2.88g／L）、ALB（43.57±5.83 g／L比43.10±6.61g／L）变化无统计学差异（t值分别为：0.317、0.583、0.385、0.262、0.255，p值均大于0.05）；2．密度梯度离心法和贴壁培养法分离纯化兔MSCs，传代至第3代后倒置显微镜观察显示MSCs形态及分布良好；免疫组化分析MSCs的BrdU标记率大于90％，可以满足移植示踪需要；3．荧光免疫组织化学分析显示，存活的16只动物中有13只结果为阳性，移植阳性率约为81.2％（13／16），证实移植的MSCs可以在病理性肝脏组织内存活。4．移植MSCs至病理性肝脏（肝纤维化）后，血清ALT下降（146.96±63.12 U／L比101.26±39.23 U／L），与移植MSCs前相比有统计学差异（t=2.459，p＜0.05），AST（44.89±7.95 U／L比42.35±16.35U／L）、TB（19.66±4.32umol／L比20.87±5.32umol／L）、DB（11.37±2.70umol／L比11.79±2.72umol／L）、TP（68.57±3.07g／L比69.13±3.38g／L）、ALB（41.93±5.95g／L比42.04±5.37g／L）变化无统计学差异（t值分别为：0.558、0.691、0.437、0.488、0.059，p值均大于0.05）。结论：超选择性门静脉分支内移植MSCs后，移植细胞可以在纤维化受体肝脏组织内存活，移植3w后MSCs存活率达81.2％；反映肝功能受损的指标（AST）较移植前有一定程度改善。此项实验研究提示：通过介入技术做超选择性门静脉分支内MSCs移植可以作为一项治疗肝硬化的新手段，但需要在提高移植细胞存活率、客观评价疗效（改善肝脏功能）等方面做进一步工作。