论文题目: 超表达OsNHX1、AtDREB1A基因获得抗盐、耐低温黑麦草转基因株系
论文类型: 博士论文
论文专业: 植物学
作者: 武玉叶
导师: 王学臣
关键词: 转化体系,抗盐性,耐低温性,转基因多年生黑麦草
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 多年生黑麦草是一种重要的冷季型草坪草,近年来全球水分紧缺,土壤盐化、次生盐渍化不断加剧,而种植抗旱、耐盐的草坪草能减少水分蒸发,抑制盐碱地土壤返盐,还可以用含一定盐分的水来灌溉,节省水资源。同时在北方及过渡地带,许多草坪草品种都遭受到不同程度冻害,严重影响草坪景观。本研究的目的是通过基因工程的方法将水稻OsNHX1和拟南芥AtDREB1A基因转入黑麦草,提高其耐盐、耐低温或抗旱能力。 对多年生黑麦草再生及根癌农杆菌介导的转化体系研究发现,6个品种黑麦草种子都能诱导出愈伤组织,通过胚性愈伤组织分化再生植株。但激素及添加浓度对不同品种愈伤组织诱导率及分化率影响显著。黑麦草种子再生植株的最适激素条件是愈伤组织诱导添加9mg/L2,4-D,胚性愈伤组织的诱导添加3mg/L2,4-D,分化过程添加0.1mg/L 2,4-D和0.1mg/L6-BA。生根培养基不添加任何激素。在最适培养条件下筛选出愈伤诱导率和分化率最高的品种TopGun。后在最适再生条件下,对影响根癌农杆菌介导转化效率的两个因素进行了研究,发现在摇菌和共培养过程添加200μM乙酰丁香酮及转化前将部分胚性愈伤组织于含0.4mol/L甘露醇渗透培养基上预培养12h,能提高转化效率达19.39%。 利用建立的根癌农杆菌转化体系将水稻OsNHX1基因、拟南芥AtDREB1A基因转入了多年生黑麦草。 水稻OsNHX1基因转化黑麦草得到4个转基因株系,PCR及Southern blotting鉴定表明,OsNHX1基因成功插入黑麦草基因组中。抗盐性鉴定表明,转基因株系比野生型抗盐能力显著提高,盐胁迫下,转基因株系比野生型积累了较高的Na~+、K~+及Pro含量。 拟南芥AtDREB1A基因转化黑麦草得到的转基因株系与野生型相比,植株生长矮小,叶绿素含量增加,叶色加深。表型发生明显改变。而且转基因株系耐低温能力提高。丙二醛含量测定表明,转基因株系丙二醛含量比对照低,膜系统受伤害程度较轻。 本文利用根癌农杆菌介导的方法将OsNHX1和AtDREB1A基因转入多年生黑麦草,获得了抗盐、耐低温能力明显提高的转基因株系。为草坪草的改良奠定基础,必将加快草坪草的育种进程,带来显著的经济效益和社会效益。
论文目录:
第一章 文献综述
1.1 草坪草转基因研究进展
1.2 Na~+/H~+反向转运器与植物的抗盐性
1.3 DREB转录因子在植物非生物胁迫中的调节作用
1.4 本研究目的意义
第二章 多年生黑麦草通过完整种子高效再生植株及根癌农杆菌介导的转化体系研究
2.1 材料
2.2 实验方法
2.3 结果与分析
2.4 讨论
第三章 转OsNHX1基因耐盐黑麦草的获得
3.1 材料
3.2 实验方法
3.3 结果与分析
3.4 讨论
第四章 转AtDREB1A基因耐低温黑麦草的获得
4.1 材料
4.2 实验方法
4.3 结果与分析
4.4 讨论
结论
参考文献
致谢
个人简介
发布时间: 2005-07-18
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标签：转化体系论文; 抗盐性论文; 耐低温性论文; 转基因多年生黑麦草论文;