论文摘要
猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）是引起妊娠母猪繁殖障碍的主要病原体之一。其特征是引起感染母猪,特别是初产母猪流产,产出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔猪等,致使母猪不孕或反复发情,同时还可引起仔猪的皮炎和腹泻。PPV感染普遍存在于世界各地的猪群中,严重影响和制约着养猪业的发展。PPV自二十世纪六十年代被发现以来,许多国家先后分离到该病毒和检测到其抗体,抗体检出率为50%～80%,其中我国高达80%。近年来,PPV感染和造成的危害呈上升趋势,给养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗的开发是有效防范PPV的关键。本试验在研究PPV HN-4株生物学特性的基础上,对不同佐剂PPV灭活疫苗接种小鼠和猪体后的免疫效果进行了比较研究,以期为临床上该病的防治提供实验依据。研究内容如下:1.通过比较猪细小病毒HN-1、HN-2、HN-3、HN-4等4个不同的河南分离毒株在PK-15细胞上的增殖特性,重点研究了HN-4株的生物学特性。PPV HN-4株的TCID50和血凝效价均高于其它3个毒株,细胞病变稳定、明显易观察,对氯仿、胰酶、酸处理、热处理等均不敏感;电镜观察结果证实为圆形、直径为23～26 nm的病毒粒子;对其NS1基因进行测序,与GenBank中发表的相应序列进行分析比较,同源性达到98.6%以上。2.将猪细小病毒HN-4株纯化后用0.2%的甲醛灭活,将灭活的病毒液按不同比例分别加入白油、氢氧化铝胶和纳米铝胶佐剂制备出PPV油乳剂灭活疫苗、PPV铝胶佐剂灭活疫苗、PPV纳米铝胶佐剂灭活疫苗,制备的3种灭活疫苗的物理性状和无菌性均合格。通过对乳鼠和仔猪的安全性试验证实疫苗安全可靠,无副作用。3.将制备的3种灭活疫苗免疫小鼠,并与市售的2种疫苗作对比。在免疫后0、1、2、3、4、5、6周应用ELISA方法和流式细胞仪分别检测免疫小鼠的体液免疫及细胞免疫水平。结果显示:3种灭活疫苗均能诱导小鼠产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答,体液免疫检测结果表明PPV油乳剂疫苗组小鼠抗体效价上升较快,且抗体水平较高;细胞免疫检测结果表明PPV纳米铝胶佐剂疫苗组与对照组差异显著,能产生较高的细胞免疫应答。4.将制备的3种灭活疫苗接种猪体后进行免疫效果比较,并与市售的2种疫苗作对比。在免疫后0、1、2、3、4、5、6周应用HI和ELISA试验方法检测接种猪的体液免疫水平;用流式细胞仪检测免疫猪的细胞免疫水平。结果显示:PPV纳米铝胶佐剂疫苗能显著提高机体抗体应答的速度,产生有效保护抗体时间早于油乳剂疫苗和常规铝胶佐剂疫苗,但抗体持续时间不如油乳剂疫苗持久;细胞免疫检测结果表明,3种疫苗均能诱导机体产生细胞免疫应答,但各组之间差异不显著。