大豆降血压肽产品稳定性及安全性研究

论文摘要

在前期工作的基础上，以大豆蛋白酶解产物为研究对象，考察大豆源降血压肽活性稳定性及安全性。主要通过体内和体外检测来评价降压肽的活性，即ACE抑制活性检测和灌胃原发性高血压大鼠（SHR）后的降压活性检测。酶解反应体系由1L逐步放大到5L，检测其体外和体内活性变化情况；初步研究温度和pH对水解物产品体内外活性的影响；以热杀菌、无菌过滤、减压浓缩以及冷冻干燥等方法处理水解物，检测其体外和体内活性变化情况，并考察热杀菌样品、无菌过滤样品以及冻干品贮藏期间的体内外ACE抑制活性情况；此外，还对水解物灌胃剂量和降血压效果关系进行了研究。以酶解浓缩溶液灌胃KM小鼠，对其进行急性毒理分析。体外检测结果表明：酶解反应体系由1L放大到5L，ACE活性抑制率均达到80%以上；水解物在30℃~90℃下处理2h后，ACE抑制活性与原样相同；调整水解物pH至4~10，50℃下处理2h后，体外活性保持稳定；热杀菌处理中，85℃、100℃处理1h，其ACE抑活性保持稳定；121℃加热30min以上，活性抑制率降至59.69%；水解物pH调至4.5和5.4，经相同热杀菌处理后，结果大致相同；无菌过滤产品抑制率为85.85%，浓缩液和冷冻品调整至原来浓度后其活性抑制率分别为84.47%，84.9%；热杀菌样品、无菌过滤产品和冻干品在180d贮藏期间，其ACE活性抑制率未发生显著性变化。体内检测结果表明：水解物灌胃SHR，2h后最大降压值（P＜0.05）为18.2mmHg；经热杀菌处理后样品灌SHR，降压效果明显下降；酶解液85℃、处理15min，其最大降压值（P＜0.05）仅为11.6mmHg，而其它样品降压值均在10mmHg以下；减压浓缩、冷冻干燥、无菌过滤等方法处理后的样品，最大降压值（P＜0.05）分别为17.9mmHg、18.8mmHg、18.4mmHg；灌胃剂量增大至4倍后，降压效果不再改变；在90d贮藏中，无菌过滤样品和冻干品均保持体内活性稳定性。体外活性检测与体内试验差异说明：与原液相比，肽液中肽组成在热作用下发生变化，使得肽在体内代谢后抵达靶器官或组织后，仅保留了较少的有效肽成分。急性毒理试验表明：大豆蛋白酶解物不具有毒性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 大豆的开发与利用
• 1.2 大豆多肽的理化特性和功能性
• 1.2.1 大豆多肽的理化特性
• 1.2.2 大豆多肽的功能性
• 1.3 大豆多肽在食品加工中的应用
• 1.4 大豆源降血压肽概述
• 1.5 降血压肽作用机制和检测方法
• 1.5.1 ACE 致高血压机制
• 1.5.2 降血压肽活性检测
• 1.6 国内外降血压肽研究进展
• 1.7 降血压肽的前景展望与研究意义
• 1.8 本实验方案概述
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验原料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 实验药品
• 2.1.4 实验动物
• 2.2 溶液及试剂配制
• 2.2.1 福林酚试剂的配制
• 2.2.2 三氯乙酸（TCA）溶液的配制
• 2.2.3 硼酸缓冲溶液的配制
• 2.2.4 马尿酰组氨酰亮氨酸（HHL）溶液的配制
• 2.2.5 血管紧张素转化酶的配制
• 2.2.6 盐酸溶液的配制
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 大豆蛋白酶解液的制备
• 2.3.2 可溶性氮测定
• 2.3.2.1 小牛血清蛋白标准曲线的绘制
• 2.3.2.2 水解前后可溶性氮测定
• 2.3.3 水解度计算
• 2.3.4 ACE 抑制的体外检测
• 2.3.5 SHR 血压测定
• 2.3.6 样品处理
• 2.3.6.1 热和酸处理
• 2.3.6.2 热杀菌处理
• 2.3.6.3 减压浓缩、冻干、无菌过滤
• 2.3.6.4 长期贮藏样品预处理
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 体外活性稳定性研究
• 3.1.1 酶解体系放大实验的体外活性检测
• 3.1.2 酶解液体外活性稳定性初步研究
• 3.1.2.1 热处理对酶解液 ACE 抑制活性的影响
• 3.1.2.2 pH 对酶解液 ACE 抑制活性的影响
• 3.1.3 酶解液热杀菌稳定性研究
• 3.1.3.1 酶解液热杀菌后 ACE 抑制活性的变化
• 3.1.3.2 酶解液调酸热杀菌后 ACE 抑制活性的变化
• 3.1.4 酶解液经减压浓缩、无菌过滤、冷冻干燥处理后其抑制活性的变化
• 3.1.5 降血压肽产品贮藏过程中 ACE 抑制活性情况
• 3.2 体内活性稳定性研究
• 3.2.1 酶解体系放大实验的体内活性检测
• 3.2.2 热杀菌后酶解液降压活性变化
• 3.2.2.1 酶解液热杀菌后降压活性的变化
• 3.2.2.2 pH5.4 酶解液热杀菌后降压活性的变化
• 3.2.2.3 pH4.5 酶解液热杀菌后降压活性的变化
• 3.2.3 减压浓缩、无菌过滤、冷冻干燥处理后酶解液降压活性变化
• 3.2.4 不同剂量肽液灌胃 SHR 的降压效果
• 3.2.5 降血压肽产品贮藏后其降血压活性
• 3.3 降血压肽产品急性毒理试验
• 3.4 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录