新生隐球菌穿越血脑屏障脑微血管内皮细胞机制及其对中枢神经系统的影响

论文摘要

[背景]细胞凋亡和紧密连接开放，破坏了血脑屏障内皮细胞的完整性，通透性增加。[目的]证实脑微血管内皮细胞凋亡和紧密连接的破坏促使新生隐球菌穿越血脑屏障。[方法]应用新生隐球菌感染血脑屏障模型、新生隐球菌感染C57BL/6小鼠模型、透射电镜、扫描电镜、流式细胞仪、荧光免疫细胞化学、免疫组化等方法。[结果]新生隐球菌感染导致脑微血管内皮细胞凋亡、紧密连接开放，穿越血脑屏障。[结论]发病机制主要有：①新生隐球菌的跨膜作用；②脑微血管内皮细胞紧密连接开放；③脑微血管内皮细胞凋亡；④相关细胞因子导致的内皮细胞通透性的增加。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写词表
• 详细摘要
• 前言
• 第一部分 新生隐球菌对血脑屏障内皮细胞凋亡的影响
• 1.前言
• 2.材料和方法
• 2.1 材料和试剂
• 2.2 方法
• 2.3 新生隐球菌侵袭血脑屏障模型建立
• 2.4 实验分组
• 2.5 流式细胞仪检测血脑屏障EC的凋亡率
• 2.6 透射电镜
• 2.7 扫描电镜
• 2.8 荧光免疫细胞化学检测Bcl-2
• 2.9 荧光免疫细胞化学检测Bax
• 3.统计学
• 4.结果
• 4.1 HUVEC鉴定
• 4.2 HUVEC生长曲线
• 4.3 HUVEC分裂指数
• 4.4 EC凋亡率
• 4.5 透射电镜观察结果
• 4.6 扫描电镜观察结果
• 4.7 Bcl-2的表达
• 4.8 Bax的表达
• 5.讨论
• 第二部分 新生隐球菌对血脑屏障紧密连接通透性的影响
• 1.前言
• 2.材料和方法
• 2.1 试剂和设备
• 2.2 细胞培养
• 2.3 扫描电镜观察
• 2.4 ZO-1蛋白检测
• 2.5 VEGF蛋白检测
• 2.6 IL-6蛋白检测
• 3.结果
• 3.1 扫描电镜
• 3.2 ZO-1蛋白的表达
• 3.3 VEGF蛋白的表达
• 3.4 IL-6蛋白的表达
• 4.讨论
• 第三部分 新生隐球菌对C57BL／6小鼠大脑皮质的影响
• 1.前言
• 2.材料和试剂
• 2.1 菌株
• 2.2 试剂及配制
• 2.3 实验仪器
• 3.C57BL／6小鼠新生隐球菌感染模型建立
• 3.1 实验动物
• 3.2 动物分组
• 3.3 时相点
• 3.4 取材
• 3.5 透射电镜
• 3.6 PAS染色
• 3.7 细胞凋亡检测
• 3.8 免疫组织化学
• 3.8.1 Bcl-2蛋白的检测
• 3.8.2 Bax蛋白的检测
• 3.8.3 VEGF蛋白的检测
• 3.8.4 IL-6蛋白的检测
• 3.8.5 ZO-1蛋白的检测
• 3.8.6 b-FGF蛋白的检测
• 3.8.7 BDNF蛋白的检测
• 3.9 结果判定
• 4.统计学分析
• 5.结果
• 5.1 透射电镜
• 5.2 肺组织PAS染色
• 5.3 大脑皮质PAS染色
• 5.4 细胞凋亡
• 5.5 Bcl-2蛋白的表达
• 5.6 Bax蛋白的表达
• 5.7 VEGF蛋白的表达
• 5.8 IL-6蛋白的表达
• 5.9 ZO-1蛋白的表达
• 5.10 b-FGF蛋白的表达
• 5.11 BDNF蛋白的表达
• 6.讨论
• 全文总结
• 综述
• 致谢
• 发表文章