酸提香菇多糖的提取分离、结构鉴定及抗氧化活性研究

论文摘要

香菇是一种集营养、保健和药用功效于一体的可直接利用的药食两用菌类,广泛的分布于我国各省。香菇中含多种有效药用成分,尤其含有一种非特异免疫刺激剂（具有抗病毒、抗肿瘤、降血糖等生物活性的香菇多糖）。并且在临床上得到广泛应用。本文以香菇柄为原料,首次采用酸为提取剂对香菇中水溶性多糖进行提取、分离、纯化、结构的初步鉴定、生物活性的研究。实验具体分为以下几部分:1.采用酸浸提法提取香菇多糖,以酸浓度、料液比、浸提时间、浸提温度和加醇比为影响因素,通过五元二次回归通用旋转组合设计,确定出优化的主要工艺条件是:酸浓度0.16-0.23 mol/L、料液比1:36-1:49、浸提时间2.7h-3.8h、浸提温度50℃-67.8℃、加醇比1:2-1:3,4℃醇沉24h。浸提1次提取多糖得率为7.61%,浸提2次提取多糖得率可达13.56%。2.研究了香菇多糖的分离纯化方法,并进行纯度鉴定。采用鞣酸法脱除游离蛋白,双氧水脱色,得到初步纯化的多糖。再经过乙醇梯度分级,得到三种级分多糖SP1、SP2、SP3得率分别为25.58%、64.77%、9.64%。通过冻融离心,Sephadex G-100柱层析检验,香菇多糖SP2为相对均一多糖。且中性糖含量为56.79%,糖醛酸含量为28.11%,蛋白质含量为1.20%。3.对香菇多糖SP2结构进行了初步研究,采用凝胶色谱法（GPC）测定香菇多糖SP2分子量,重均分子量为5.203×104Da;通过气相色谱检测香菇多糖SP2的单糖组成,其香菇多糖SP2的单糖组成为葡萄糖、甘露糖和半乳糖,并以葡萄糖为主;红外扫描的结果表明香菇多糖SP2具有D-吡喃葡萄糖构型;4.采用化学发光法考察香菇多糖SP和SP2的抗氧化活性,结果表明香菇多糖SP和SP2都具有清除超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢的能力。通过化学模拟体系体外和体内抗氧化试验表明,香菇多糖SP和SP2具有抑制小鼠红细胞溶血,抑制小鼠肝组织匀浆MDA的生成和肝线粒体肿胀度的作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1 香菇简介
• 2 香菇多糖的提取、分离和纯化
• 2.1 提取
• 2.2 分离
• 2.3 纯化
• 2.4 纯度鉴定
• 3 香菇多糖的分析测定方法
• 3.1 香菇多糖的理化性质
• 3.2 香菇多糖含量的测定
• 3.3 香菇多糖分子量的测定
• 3.4 香菇多糖的分子结构
• 3.5 香菇多糖的结构分析
• 4 香菇多糖的生物活性及其机理
• 4.1 抗肿瘤
• 4.2 抗病毒
• 4.3 免疫调节
• 4.4 其它药理作用
• 4.5 香菇多糖的构效关系
• 5 课题构想
• 5.1 本课题研究目的意义
• 5.2 研究的主要内容
• 第二章 香菇多糖的HCl提取研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 原料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 香菇中多糖的HCl提取流程
• 2.2.2 香菇的前处理
• 2.2.3 葡萄糖标准曲线的制作
• 2.2.4 多糖含量的计算
• 2.2.5 HCl提取单因素实验
• 2.2.6 正交试验
• 2.2.7 数据处理
• 3 结果与分析
• 3.1 葡萄糖标准曲线
• 3.2 HCl提取单因素实验
• 3.2.1 提取时间对香菇多糖提取率的影响
• 3.2.2 提取温度对香菇多糖提取率的影响
• 3.2.3 料液比对香菇多糖提取率的影响
• 3.2.4 酸的浓度对香菇多糖提取率的影响
• 3.2.5 加醇比对香菇多糖提取率的影响
• 3.3 酸提香菇多糖提取率数学模型的建立
• 3.3.1 回归数学模型解析
• 3.3.2 提取率模型优化
• 4 结论
• 第三章 香菇多糖提取、分离和纯化方法的研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 香菇多糖的提取、分离、纯化工艺流程
• 2.2.2 香菇多糖的纯度鉴定
• 2.2.3 糖含量及相关成分的测定
• 3 结果与分析
• 3.1 蛋白质标准曲线
• 3.2 葡萄糖标准曲线
• 3.3 葡萄糖醛酸标准曲线
• 3.4 香菇多糖的提取
• 3.5 香菇多糖的分离、纯化
• 3.5.1 脱蛋白
• 3.5.2 乙醇梯度分级
• 3.6 级分多糖的纯度鉴定
• 3.6.1 冻融离心
• 3.6.2 常压凝胶柱层析
• 3.7 中性糖、糖醛酸及蛋白质的含量
• 4 结论
• 第四章 酸提香菇多糖结构初级鉴定
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 紫外-可见光分析
• 2.2.2 红外光谱分析
• 2.2.3 分子量的测定
• 2.2.4 氨基酸组成分析
• 2.2.5 级分多糖的单糖组成分析
• 3 结果与分析
• 3.1 紫外-可见光谱分析
• 3.2 红外光谱分析
• 3.3 分子量的测定
• 2氨基酸组成分析'>3.4 香菇多糖SP₂氨基酸组成分析
• 2单糖组成分析'>3.5 香菇多糖SP₂单糖组成分析
• 4 结论
• 第五章 香菇多糖的抗氧化活性研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验样品
• 2.1.2 实验动物
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 清除超氧阴离子
• 2.2.2 清除羟基自由基
• 2.2.3 清除过氧化氢
• 2.2.5 还原能力测定
• 2.2.6 对小鼠肝匀浆体外生成MDA的影响
• 2.2.7 小鼠肝线粒体肿胀度的测定
• 2O₂诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响'>2.2.8 H₂O₂诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响
• 2.2.9 统计学分析
• 3 结果与分析
• 3.1 清除超氧阴离子测定
• 3.2 清除羟基自由基测定
• 3.3 清除过氧化氢测定
• 3.4 还原能力测定
• 3.5 对小鼠肝匀浆MDA生成的影响
• 3.6 对小鼠肝线粒体肿胀度的影响
• 2O₂诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响'>3.7 对H₂O₂诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响
• 4 结论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录