论文摘要
系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种典型的自身免疫性疾病，以B淋巴细胞多克隆活化增值，大量的自身抗体产生，循环免疫复合物增高，补体降低和多器官非感染性炎症为特点。从免疫学角度，SLE是针对多种自身抗原，主要为核内抗原如：DNA、组蛋白和核小体等产生的自身免疫反应。目前国内外已经从自身抗原的产生和异常（如是否为凋亡细胞的增多或者凋亡过程的异常引起；氧自由基损伤引起染色质和核小体的异常）、自身抗原的表位扩展、抗原提呈过程相关基因转录异常、T细胞活化信号的异常、B细胞的多克隆增生、自身抗体的产生、免疫复合物的形成与沉积、免疫调节和免疫耐受机制的异常等方面对SLE展开了大量的研究，取得了很多显著的成果。但其发病的始因究竟是免疫机制引发的基因转录调控的改变，还是基因变异引起免疫机制的改变，目前还不明确。人类主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex，MHC）即人类白细胞抗原（human leucocyte antigen，HLA），其Ⅱ类分子除了在器官移植排斥反应中起作用外，更重要的生物学功能是参与抗原提呈过程，识别和提呈抗原肽，进而启动特异性的免疫应答。MHCⅡ类分子能够调节机体对抗原的免疫应答能力，从而调节抗体的产生和免疫复合物的形成。因此，MHCⅡ类分子可能在SLE的发病中起重要的作用。HLA-DM基因定位于MHCⅡ类基因区域，属于抗原加工提呈相关基因，其编码的HLA-DM分子在MHCⅡ类分子途径的抗原提呈过程中，作为经典的MHCⅡ类分子的分子伴侣发挥重要作用。因此HLA-DM基因被认为是一种可能的疾病易感基因。自HLA-DM被发现以来，已经有HLA-DM与疾病的相关性报道，尤其是自身免疫性疾病，如：Ⅰ型糖尿病、类风湿性关节炎等。国内外的研究较多是SLE与经典HLA-Ⅱ基因（如DR、DP及DQ等基因）多态性的相关性分析，最近的研究发现HLA-DM基因多态性与SLE也有一定的相关性。因目前研究结果不尽相同，可能与地理位置种族及研究方法等多种因素有关，故本研究首先筛选一种可靠的检测基因多态性的实验方法，最终确定应用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应（restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction，RFLP-PCR）方法检测HLA-DM基因的多态性，继而分析HLA-DM基因多态性与SLE发生的相关性，及与SLE患者自身抗体、活动性、肾损害等的相关性。以期从基因水平上探讨HLA-DM基因对SLE疾病易感性、活动性及预后的影响。第一部分：通过对多种检测基因多态性的PCR方法，如序列特异性引物（sequence specific primers，SSP）-PCR、单链构象多态性（single strand conformation polymorphism，SSCP）-PCR、RFLP-PCR等进行比较分析，得出本研究适合应用RFLP-PCR方法进行分析。第二部分：用RFLP-PCR技术对SLE患者及正常人进行HLA-DMA及HLA-DMB等位基因检测及分型，结果共检出HLA-DMA等位基因型4种，基因型6种；HLA-DMB等位基因型3种，基因型6种；HLA-DM单倍型29种。其中，HLA-DMB*0101／0103基因型在SLE组与对照组间的分布不同，SLE组高于健康对照组，差异有显著性。提示HLA-DM基因多态性与SLE的发生有一定的相关性，HLA-DMB*0101／0103可能为SLE的易感基因型。第三部分：对HLA-DM基因与SLE患者自身抗体、疾病活动性及肾损害的相关性进行分析。结果显示：①HLA-DMB*0103等位基因型的SLE患者，抗U1-RNP抗体阳性率增加；②HLA-DMB*0102等位基因型的SLE患者病情更易活动，肾脏受累比例也增加，而HLA-DMB*0101等位基因型的SLE患者病情更趋稳定，肾脏受累比例也降低；③HLA-DMB*0101／0103基因型的SLE患者病情较为稳定，一般情况良好；④HLA-DMB*0102／0102基因型的SLE患者，更易发生肾脏损伤。提示HLA-DM基因（尤HLA-DMB基因）多态性与SLE患者自身抗体的产生、疾病的活动性及肾脏受累情况均有一定的相关性。HLA-DM基因多态性可以在一定程度上预测SLE患者疾病的活动性及肾脏受损情况。