论文摘要
目的刚地弓形虫是人和动物感染率极高的一种机会致病原虫,其中速殖子阶段是主要的致病阶段。速殖子的大规模全蛋白质组学分析仍然还在进行,但目前尚无弓形虫的完全蛋白质组图。所以本研究应用蛋白质组学技术分析刚地弓形虫可溶性速殖子抗原（soluble tachyzoite antigen,STAg）组分,寻找具有免疫原性的抗原,为弓形虫疫苗有效候选抗原研究提供理论和实验依据。方法常规复苏弓形虫速殖子,腹腔接种BALB/c小鼠,转种3次恢复其活力,收集腹腔冲洗液,纯化,离心,上清液即为STAg,用三氯醋酸丙酮沉淀法制备2-DE样品。STAg样品,通过等电聚焦和SDS-PAGE电泳技术分离获得弓形虫STAg组分全蛋白点,用兔抗弓形虫血清和兔纯血清（阴性对照）做免疫印迹获得免疫原性的蛋白点。切取这些点、进行胶内酶解,ABI4700质谱仪对蛋白点进行鉴定分析。结果2-DE凝胶图显示1227个蛋白斑点,经质谱对其鉴定,得到230个弓形虫蛋白点,Western blot检测显示,16个蛋白点具有免疫原性。这些蛋白点中,主要表面抗原1（SAG1, 4个斑点）曾有报道具有免疫原性,热休克蛋白70（Hsp70）的免疫原性尚存在争议,其余的这些蛋白点:假定的蛋白质二硫键异构酶（putative protein disulfide isomerase）,冠蛋白（coronin）,热休克蛋白60（Hsp60）,丙酮酸激酶（pyruvate kinase）2个点斑点,谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase, putativ）,,蛋白激酶C受体1（receptor for activated C kinase 1）,苹果酸脱氢酶（malate dehydrogenase）,尿苷磷酸化酶（uridine phosphorylase）2个斑点和过氧化氧化还原蛋白（peroxiredoxin）都具有免疫原性均为本研究新发现。结论对所得到的16个阳性蛋白点进行分析,除SAG1（P30）和Hsp70外,其余9种具有免疫原性的抗原均为本研究新发现。这些免疫原性的蛋白点均非表面抗原或排泄-分泌抗原,而是存在于速殖子内。此结果提示,弓形虫速殖子内存在一些尚未证实的免疫原性抗原,可能具有更强的保护性,有深入研究的必要性,可作为弓形虫免疫诊断和疫苗研发新的候选分子。