根面牙骨质对人牙周韧带细胞分化影响的实验研究

论文摘要

目的:牙骨质是覆盖在牙根表面的薄层矿化结缔组织,近年研究表明牙骨质基质含有牙骨质附着蛋白（cementum attachment proteins,CAP）和牙骨质蛋白-23（cementum protein-23,CP-23）,被认为是牙骨质特异性分子,具有促进细胞增殖、分化等多种生物学作用,因此牙骨质本身在促进牙周组织再生中的作用越来越受到重视。因此,本研究拟用人牙周韧带细胞（human periodontal ligamentcells,HPDLCs）探讨根面原位保留的牙骨质对其分化的影响,以期进一步揭示牙骨质的功能,并为临床应用中根面保留牙骨质提供理论依据。方法:1.选用因正畸拔除的牙齿,组织块法培养人牙周韧带细胞。2.根片制备:将刮除了牙周韧带的牙齿的牙根纵辟为两半,去除牙髓组织。一半彻底刮除根面牙骨质,暴露牙本质,作为牙本质根片组（PDLCs+D）;另一半保留牙骨质,不暴露其下的牙本质,作为牙骨质根片组（PDLCs+C）。3.接种第二代牙周韧带细胞至根片表面,复合培养7天后,收集根片上细胞,提取RNA,RT-PCR检测两组细胞中牙骨质附着蛋白（CAP）和牙骨质蛋白23（CP-23）基因表达情况,用β-action作为内参照,用软件测量标准曲线,获得每组mRNA的表达量,以每组检测的mRNA与β-action mRNA之比值表示CAP和CP-23的基因表达量。4.取与PDLCs复合培养7天的牙骨质片和牙本质片各20个,分别放入半透膜袋内,植入裸鼠皮下,八周后处死裸鼠取出标本,固定、脱钙,HE染色,观察牙本质片和牙骨质片上新生组织形成,透射电镜观察新生组织的超微结构。结果:1.PDLCs+C和PDLCs+D中CAPmRNA的表达量分别是0.00375和0.00325;对CP-23,PDLCs+C和PDLCs+D中CP-23mRNA的表达量分别是0.000073和0.000000662。统计分析表明两组间的CAP和CP-23mRNA表达量均有显著性差异。2.HE染色观察显示20个牙骨质片中有16牙骨质片表面有淡染的牙骨质样基质形成,牙本质片表面无此结构形成,仅有纤维组织形成,与其表面有较大的间隙。3.透射电镜表明细胞附着在新形成的组织表面,核仁深染,细胞的胞浆内有大量的粗面内质网,新形成的硬组织与原有牙骨质之间有明显的界限,连接紧密,没有间隙形成。结论:我们的研究结果表明根面保留的牙骨质可能促进体外培养的人牙周韧带细胞向成牙骨质细胞方向分化,提示根面保留牙骨质可能有利于牙周组织再生。

论文目录

• 中文摘要
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• 主要英文缩略语表
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文