鸽生长性状相关基因多态性研究

论文摘要

本研究选择GHR、MC3R、MC4R、apoB四个基因作为候选基因,以双城市羽泉种鸽场的广东石岐肉鸽和哈尔滨地区灰色家鸽为试验对象,采用克隆测序结合PCR-SSCP的方法,检测了这些基因部分片段的SNPs,并分析了突变位点导致的多态性与生长及体组成性状之间的相关性。主要研究结果如下:1.克隆了鸽GHR基因内含子9序列,片段大小为259bp,已发布到GenBank（Accession No:EF471355）,与鸡GHR基因内含子9同源性为70.01%。检测了GHR基因内含子9、外显子10和3’-UTR部分的多态性,共检测出3个多态位点,最小二乘分析表明GHR基因在试验群体不同个体间的多态性与生长和体组成性状无相关性。2.在MC3R基因编码区检测到错义突变T91G,在两个试验群体中均检测到AA、BB和AB三种基因型。其中在石岐肉鸽群体中,BB基因型个体的活重（BW）、屠体重（CW）、全净膛重（HCW）显著高于AA基因型个体;在灰色家鸽群体中,AA基因型个体的活重（BW）、屠体重（CW）、肝脏重（LW）、全净膛重（HCW）显著高于BB基因型个体。3.克隆了长度为985bp的MC4R基因编码区序列,已发布到GenBank（Accession No:EU596432）,发现了3个突变位点:突变位点T246C导致的三种基因型对两群体鸽的生长和体组成性状均无影响（P>0.2）;突变位点A621G未检测出多态性;突变位点A903G导致的三种基因型对石岐肉鸽活重（BW）、屠体重（CW）、全净膛重（HCW）有显著影响（P<0.05）,AA基因型为影响石岐肉鸽体重的有利基因型。4.利用MC3R基因T91G突变位点和MC4R基因A903G突变位点产生的合并基因型在鸽群体中与生长和体组成性状作最小二乘分析,结果表明合并后基因型对石岐肉鸽全净膛重（HCW）影响显著（P<0.05）。多重比较结果表明,BBAA型全净膛重（HCW）显著高于AABB型。5.在apoB基因第26外显子上发现一个突变位点A57G,该突变位点导致的三种基因型对石岐肉鸽屠体率（CW/BW）及灰色家鸽屠体重（CW）、腹脂率（AFW/BW）、肝脏重（LW）均有显著影响（P<0.05）;对灰色家鸽活重（BW）、腹脂重（AFW）、肝脏率（LW/BW）及石岐肉鸽的活重（BW）和全净膛率（HCW/BW）有一定影响（P<0.2）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 研究背景及科学意义
• 1.1.1 鸽的概述及研究概况
• 1.1.2 鸽的生物学特性及其经济价值
• 1.1.3 鸽在分子水平上的研究现状
• 1.2 GHR、MC3R、MC4R、APOB 基因国内外研究进展
• 1.2.1 生长激素受体基因
• 1.2.2 黑素皮质素受体3、4 基因
• 1.2.3 载脂蛋白B 基因
• 1.3 单核苷酸多态性（SNPS）概念及其检测方法
• 1.3.1 单核苷酸多态性（SNPs）概念
• 1.3.2 PCR-SSCP 法
• 1.3.3 PCR-RFLP 法
• 1.3.4 DNA 测序法
• 1.4 研究目的及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验材料的采集
• 2.1.2 主要药品及试剂
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.1.4 缓冲液及常用试剂的配制
• 2.1.5 主要分子生物学软件
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 全基因组DNA 提取
• 2.2.2 基因组DNA 的浓度测定和质量检测
• 2.2.3 生长性状相关基因引物的设计与合成
• 2.2.4 PCR 扩增
• 2.2.5 DNA 片段的克隆测序
• 2.2.6 PCR-SSCP 检测
• 2.2.7 统计分析方法
• 3 结果与分析
• 3.1 基因组提取结果检测
• 3.1.1 DNA 浓度与纯度紫外分光光度检测
• 3.1.2 DNA 质量的琼脂糖凝胶电泳检测
• 3.2 鸽GHR 基因的多态性及其与生长性状的相关分析
• 3.2.1 GHR 基因内含子9 的克隆及SNPs 分析
• 3.2.2 GHR 外显子10 引物3 的SNPs 分析
• 3.2.3 GHR 外显子10 引物4 的SNPs 分析
• 3.2.4 GHR 外显子10 引物5 的SNPs 分析
• 3.2.5 GHR 3’-UTR 的SNPs 分析
• 3.2.6 多态性检测结果的分析
• 3.3 鸽MC3R 基因的多态性及其与生长性状的相关分析
• 3.3.1 MC3R 基因引物7 的SNPs 分析
• 3.3.2 MC3R 基因引物8 的SNPs 分析
• 3.3.3 多态性检测结果的分析
• 3.4 鸽MC4R 基因的多态性及其与生长性状的相关分析
• 3.4.1 鸽MC4R 基因的克隆
• 3.4.2 鸽MC4R 基因编码区引物10 的SNPs 分析
• 3.4.3 鸽MC4R 基因编码区引物11 的SNPs 分析
• 3.4.4 鸽MC4R 基因编码区引物12 的SNPs 分析
• 3.4.5 多态性检测结果的分析
• 3.5 MC3R-T91G 位点和MC4R-A903G 位点合并基因型分析
• 3.6 鸽APOB 基因的多态性及其与生长性状的相关分析
• 3.6.1 鸽apoB 外显子26 的SNPs 分析
• 3.6.2 多态性检测结果的分析
• 4 讨论
• 4.1 GHR 基因的多态性与鸽生长性状的相关性
• 4.1.1 GHR 基因内含子9 的克隆
• 4.1.2 GHR 基因多态性
• 4.2 MC3R 基因的多态性与鸽生长性状的相关性
• 4.3 MC4R 基因的多态性与鸽生长性状的相关性
• 4.3.1 MC4R 基因的克隆
• 4.3.2 MC4R 基因多态性
• 4.4 MC3R 和MC4R 基因合并基因型分析
• 4.5 apoB 基因的多态性与鸽生长性状的相关性
• 4.6 PCR-SSCP 技术的影响因素
• 4.6.1 引物的设计
• 4.6.2 凝胶的浓度
• 4.6.3 上样、电泳时电压和温度的影响
• 4.6.4 染色的影响
• 4.6.5 DNA 片段中点突变的位置对SSCP 的影响
• 4.6.6 SSCP 的结果断定
• 4.7 存在的问题和有待进一步研究解决的问题
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文