碱性成纤维细胞生长因子与胶原对组织工程软骨体外构建的影响

论文摘要

目的:①在单层培养系统中评价碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对兔生长板软骨细胞增殖和分化的作用。并筛选其用于体外软骨组织成团培养的最佳浓度:②以成团培养（pellet culture）为培养系统,以兔生长板软骨细胞为种子细胞,探讨bFGF与基质胶原单独及联合应用对体外软骨组织构建的影响,探索构建组织工程软骨的最佳条件。 方法:①分离并单层培养兔生长板软骨细胞,添加不同浓度的bFGF。②采用WST-8染色法检测细胞增殖倍数;甲苯胺蓝染色,观察软骨细胞外基质酸性粘多糖的分泌;羟脯氨酸法和阿新蓝（Alcian Blue）法测定基质产量;酶动力学方法测定碱性磷酸酶（ALP）活性。③离心后三维成团培养兔生长板软骨细胞,并根据第一部分实验结果添加适量的bFGF和胶原。④HE染色,观察新生软骨组织形态;免疫组化检测Ⅰ型和Ⅱ型胶原表达;Hoechst33258染色,检测新生软骨组织中DNA含量;甲苯胺蓝染色,观察软骨细胞外基质酸性粘多糖的分泌;羟脯氨酸法与阿新蓝（Alcian Blue）法测定软骨细胞外基质中胶原与蛋白多糖的含量。 结果:在单层培养体系中:①经历多次传代后,软骨细胞发生了去分化,由多角形、

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 bFGF对生长板软骨细胞的生物学效应和量效关系
• 1.1 引言
• 1.2 实验材料
• 1.3 实验方法
• 1.4 实验结果
• 1.5 讨论
• 1.6 结论
• 第二部分 胶原与bFGF对生长板软骨细胞三维培养的影响
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料
• 2.3 实验方法
• 2.4 实验结果
• 2.5 讨论
• 2.6 结论
• 2.7 附图
• 全文总结
• 参考文献
• 英文缩略词表
• 发表文章
• 致谢