格林—巴利综合征患者脑脊液差异蛋白质组学研究

论文摘要

格林-巴利综合征（Guillain-Barre’Syndrome,GBS）又称急性炎性脱髓鞘性多神经病（acute Inflammatory demyelinating polyneuropathy,AIDP）,是累及周围神经（peripheral nervous system）和神经根髓鞘的,以急性、对称地进行性、获得性、炎性为特征的自身免疫性疾病。其病理特征为周围神经血管周围的淋巴细胞和巨噬细胞的浸润,为炎症伴髓鞘脱失即炎性脱髓鞘。是目前急性软瘫的最常见病因。在发展中国家发病率比较高,多为急性发病,预后较差。即使得到加强监护,仍然有3%—7%的死亡率,此外,大约7%—15%的病人会留有神经学上的后遗症,如:面瘫、下肢无力伴垂足、手无力和肌萎缩、植物神经障碍等。GBS的广泛被接受的诊断标准仍然是描述性的,尚缺乏明确的定义和确切的诊断标志物,其病因和免疫学发病机制迄今未明。大量的实验证明,GBS患者脑脊液（cerebrospinal fluid CSF）中存在蛋白质的异常表达,这为我们研究GBS提供了一个独特的窗口。到目前为止,国内对GBS脑脊液的研究尚缺乏系统的研究,多停留在经典实验生物学研究水平。本研究将蛋白质组学技术体系应用于GBS脑脊液的研究,通过优化双向电泳分离技术、质谱鉴定技术、搜索大量数据库,检测到GBS患者与正常人脑脊液的差异蛋白,并对某些明显的差异蛋白进行后期的免疫学验证,为疾病的早期诊断、有效药物靶点的发现、疾病发病机制的探讨提供实验和理论依据。目的:建立GBS患者与正常人脑脊液比较蛋白质组学的技术研究体系,寻找并鉴定GBS患者脑脊液特异蛋白,为其发病机制提供线索,为临床诊断和治疗提供依据。方法:分别取GBS疾病组和对照组的新鲜脑脊液,冰丙酮沉淀法提取总蛋白,进行第一向等电聚焦电泳（IEF）和第二向十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质组,ImageMaster 2D图像分析软件对分析胶进行比较分析,识别差异表达明显的蛋白质点。抠取制备胶上相应的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI/TOF/MS）得到肽质量指纹图谱（PMF）,搜索SWISSPROT数据库鉴定蛋白质点。随后对感兴趣的蛋白质点行酶联免疫吸附实验（ELISA）进行免疫学验证。结果:分别获得GBS患者及正常对照组脑脊液蛋白质组表达图谱,识别出387±29（实验组）和398±36（对照组）个蛋白质点。GBS患者和对照组脑脊液的双向电泳图谱存在明显差异,通过统计学分析,10个蛋白质点在两组间存在显著差异,其中4个蛋白质点在GBS疾病组中表达明显上调,6个降低。其中CystatinC表达下调,是改变最明显的蛋白质点,为本实验首次发现。随后的ELISA也证实GBS患者的脑脊液中Cystatin C的浓度明显低于对照组。结论:本研究成功建立了应用双向电泳及生物质谱方法研究GBS患者脑脊液蛋白质组学的技术体系。识别并鉴定了10个与格林-巴利综合征疾病有关的特异蛋白点,并在免疫学角度验证了Cystatin C表达下调。这些蛋白质与GBS的确切关系有待进一步探讨。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 第一部分 格林-巴利综合征患者脑脊液蛋白质组学技术体系的建立
• 实验材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 格林-巴利综合征患者脑脊液的差异蛋白质质组学研究
• 实验材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表