论文摘要
本文以日本三角涡虫（Dugesia japonica）和阳城多目涡虫（Polycelis yangchengensis）为材料,探索了这两种涡虫眼点再生的最适温度。结果显示:日本三角涡虫眼点再生的最适温度为22℃,阳城多目涡虫眼点再生的最适温度是14℃。在此基础上,对22℃去头避光培养的日本三角涡虫0-11天和14℃去头避光培养的阳城多目涡虫再生0天,7天,13天,14天,15天,17天,18天,19天,20天,23天,26天,29天,33天,35天,38天的再生个体,通过石蜡切片技术,观察这两种涡虫眼点的再生过程。结果显示:日本三角涡虫比阳城多目涡虫眼点再生速度快很多。日本三角涡虫再生第1天再生组织非常明显,再生第3天看到色素团,再生第4天明显看到眼点,以后各天眼点逐渐完善。阳城多目涡虫再生第7天再生组织非常明显,再生第14或15天看到很小的眼点,再生第18天看到眼点数目明显增多,再生完全至少需要38天。除了时间上的不同,两种涡虫再生组织的紧密度也不同,日本三角涡虫的新生组织比较致密,与原有组织明显不同而多目涡虫新生组织与原有组织紧密度区别不大。为了选择稳定的内参基因,本文通过Real-time PCR技术对涡虫再生研究中常用的三个内参基因—18SrRNA、ACTB和DjEF2在涡虫头部再生过程中的表达水平和稳定性进行了研究,结果表明:ACTB的原始Ct值变异系数最小（CV=8.9%）;将所得数据分别用GeNorm和NormFinder软件时行分析,结果表明:ACTB的M值为0.975（GeNorm）和稳定值为0.021（NormFinder）。因此,在涡虫头部再生研究中,ACTB为首选内参基因。使用实时荧光定量PCR技术探索了日本三角涡虫再生过程中不同时间点Djnos的表达,结果显示,在日本三角涡虫头部再生的第3天,Djnos表达比较高,而再生的0-3天是眼点分化的关键时期,说明Djnos和日本三角涡虫眼点前期的形成有关。在再生第12天,表达也比较高,可能与生殖干细胞的形成和保持有关;Djnos在日本三角涡虫的有性个体和无性个体中均表达,而且在无性个体的表达量高于有性个体。