CD8～+T淋巴细胞与颗粒酶B在病毒性心肌炎中的作用及穿孔素抗体对颗粒酶B表达的影响

论文摘要

目的探讨CD8+T淋巴细胞及颗粒酶B在病毒性心肌炎中的作用及穿孔素抗体对颗粒酶B表达的影响。方法选用85只周龄BALB／C健康雄性小鼠，随机分为正常对照组（n=15）和病毒感染组（n=55）及穿孔素抗体治疗组（n=15）。正常对照组小鼠腹腔接种不含病毒的Eagle氏液0.15ml，病毒感染组及穿孔素抗体治疗组小鼠腹腔接种0.15mlTCID50为109／ml的CVB3Nancy株病毒液，穿孔素抗体治疗组在接种病毒后6小时和3d腹腔注射穿孔素单克隆抗体。分别于第7d、10d、14d、21d、28d随机取正常对照组小鼠3只，病毒感染组小鼠8只断髓处死，于接种第10d处死穿孔素抗体治疗组剩余小鼠13只。取各组小鼠心肌组织固定、脱水、石蜡包埋，切片后行HE染色、计算心肌病理组织学积分、免疫组化法检测CD8+T淋巴细胞、颗粒酶B表达及TUNEL法检测细胞凋亡。光镜下计算CD8+T淋巴细胞数所占浸润细胞数的百分比作为阳性细胞百分率。应用Leica Qwin V3医学图象分析系统测量颗粒酶B阳性面积所占百分率。结果1．正常对照组小鼠心肌组织形态正常，病毒感染组小鼠接种CVB3后，心肌炎的发生率为100％，7d时心肌病理改变明显，10d时达高峰，28d逐渐恢复。2．病毒感染组小鼠心肌细胞凋亡于第7d始增多（13.91±1.77）％，至10～14d凋亡达高峰（18.99±2.77）％，之后渐下降，第28d仍有少量心肌细胞凋亡存存（9.04+1.34）％。3．病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌细胞凋亡率与心肌病理积分呈显著正相关（r=0.83，P＜0.01）。4．病毒感染组小鼠心肌组织中，CD8+T淋巴细胞抗原表达于感染后7d明显增加（28.86±1.46）％，第10～14d时达高峰（66.66±1.95）％，第21d开始下降（32.86±1.56）％。5．心肌CD8+T淋巴细胞抗原表达水平与心肌病理积分及心肌细胞凋亡百分率均呈显著正相关（r=0.88，P＜0.01；r=0.86，P＜0.01）。6．病毒感染组小鼠心肌组织中颗粒酶B抗原表达于感染后7d明显增加（46.41±3.72）％，第10～14d时达高峰（67.13±1.82）％，第21d开始下降（28.01±1.66）％。7．心肌颗粒酶B抗原表达水平与心肌病理积分及心肌细胞凋亡百分率均呈显著正相关（r=0.85，P＜0.01；r=0.83，P＜0.01）。8．穿孔素抗体治疗组颗粒酶B抗原表达（6.98±1.34）％明显低于病毒感染组（67.13±1.82）％（P＜0.01）。结论1．病毒性心肌炎小鼠存在心肌细胞凋亡，且与心肌病变程度关系密切，细胞凋亡是病毒性心肌炎细胞损伤的重要表现。2．CD8+T淋巴细胞在病毒性心肌炎小鼠心肌组织浸润的炎性细胞中所占百分率与心肌组织病理积分呈显著正相关，提示CD8+T淋巴细胞系小鼠病毒性心肌炎心肌损伤的重要效应细胞。3．CD8+T淋巴细胞在病毒性心肌炎小鼠心肌组织浸润的炎性细胞中所占百分率与心肌细胞凋亡率呈显著正相关，提示CD8+T淋巴细胞可通过诱导心肌细胞凋亡而致心肌损伤。4．病毒性心肌炎小鼠心肌组织颗粒酶B阳性面积百分率与心肌组织病理积分呈显著正相关，表明颗粒酶B在小鼠病毒性心肌炎心肌损伤中起重要作用。5．病毒性心肌炎小鼠心肌组织颗粒酶B阳性面积百分率与心肌细胞凋亡率呈显著正相关，提示颗粒酶B诱导的心肌细胞凋亡在心肌炎的发生发展过程中起重要作用。6．穿孔素抗体使病毒性心肌炎小鼠心肌组织中颗粒酶B表达明显减少，为今后临床治疗病毒性心肌炎提供新的治疗策略。7．通过穿孔素至心肌细胞内是颗粒酶B的主要途径，但不是唯一途径。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• +T淋巴细胞在病毒性心肌炎中的作用'>第一部分 CD8⁺T淋巴细胞在病毒性心肌炎中的作用
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 颗粒酶B在病毒性心肌炎中的作用及穿孔素抗体对其表达的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位研究生期间发表的论文
• 学位论文评阅及答辩情况表