论文摘要
人类调节性T细胞包括CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+ regulatory Teells，简称CD4+CD25+Treg）、Tr1和Th3等多种亚型，但目前最引人注目且研究较充分的是CD4+CD25+Treg细胞。该群细胞表面还表达CD45RBlow、CD5high、CD44high、ICAM-1high和LFA-1high等，但都不具有特异性。forkhead box p3基因编码的一种核蛋白——FoxP3是CD4+CD25+Treg细胞分化发育和功能维持的重要调控基因，但是CD25-T细胞活化后也可短暂表达FoxP3，因此并不是所有FoxP3阳性细胞都是调节性T细胞。近来发现借助CD127（IL-7受体）可以识别CD4+CD25+Treg细胞与活化的T细胞：高或中等强度表达CD127的CD4+CD25+T细胞为活化的T细胞，低表达CD127的CD4+CD25+T细胞才是真正的调节性T细胞。同时还发现CD127与Foxp3的表达呈负相关。这些新发现为今后进一步研究调节性T细胞与机体整体免疫功能之间的关系提供了良好依据。CD4+CD25+Treg细胞具有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特征，即在各种刺激原（如高浓度IL-2、抗CD3单抗）作用下，调节性T细胞既不增殖也不分泌IL-2、INF-γ等细胞因子，但经T淋巴细胞受体（TCR）介导信号刺激活化后，调节性T细胞能够抑制CD4+CD25-效应性T细胞（T-resp）和CD8+T细胞的活化、增殖及其细胞因子的产生，抑制T-resp、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和自然杀伤细胞（NK）的抗肿瘤免疫反应。免疫衰老（immunosenscence）是机体的免疫功能随年龄增长而不断下降。老人主要死于感染性疾病、恶性肿瘤和难以控制的感染，这些疾病均与免疫衰老有关。有研究证实外周血中CD4+CD25+Treg细胞随年龄增长而升高。因此CD4+CD25+Treg细胞可能与免疫衰老、肿瘤、感染、移植和移植物抗宿主病等密切相关。目的（1）探索可用于检测人外周血中CD4+CD25+Treg细胞的最佳标记物，检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞，并以经典指标CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+为标准，分析和比较CD4+CD25+CD127low作为识别CD4+CD25+Treg细胞免疫标记的可行性及其优势；（2）探讨CD4+CD25+Treg细胞与免疫衰老及老年肿瘤之间的关系；（3）体外分选老年肿瘤患者CD4+CD25+T细胞，检测其表型特征，并进行体外功能测定。（4）检测不同治疗阶段急性髓细胞白血病患者外周血的CD4+CD25+Treg细胞，探讨其在白血病治疗过程中的意义。方法（1）采用双色或三色直接免疫荧光素法标记细胞抗原，包括细胞膜表面和胞核抗原，如：CD4、CD25、CD127、FoxP3等，多参数流式细胞术检测：（2）应用FACS分选CD4+CD25+CD127low、CD4+CD25-T细胞，分选后测定细胞纯度；（3）分别培养分选纯化后的淋巴细胞，观察CD4+CD25+CD127lowT细胞在抗CD3单抗、抗CD28单抗的刺激并有高浓度IL-2存在的情况下能否增殖；（4）进行混合淋巴细胞培养，比色法测定CD4+CD25+CD127lowT细胞的抑制功能。结果（1）健康人和肿瘤患者外周血CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞占CD4+T细胞百分比分别为（1．769±0．682）％和（2．958±1．392）％；（2．905±1．772）％和（5．128±2．227）％以及（5．396±1．306）％和（7．175±2．565）％。三者呈现相同的趋势，即肿瘤患者组>健康人组，且三者之间呈显著正相关（P<0．05）。（2）以外周血中CD4+T细胞设门，健康青年人（青年组）、健康老年人（老人组）和老年肿瘤患者（老年肿瘤组）CD4+CD25highT细胞分别为（1．390±0．412）％、（1．729±0．247）％和（2．150±0．769）％，CD4+CD25+FoxP3+细胞分别为（1．180±0．343）％、（2．477±0．400）％和（4．980±2．177）％，CD4+CD25+CD127lowT细胞分别为（5．213±0．942）％、（6．186±1．196）％和（7．194±1．538）％。上述三个指标呈现相同的变化规律，即老年肿瘤组最高，老人组次之，青年组最低。三组人群中三个指标的表达水平均具有显著性差异，且三个指标之间也呈正相关（P<0．05）。（3）经300U／mL的IL-2和抗CD3、抗CD28单抗刺激后，老年肿瘤患者外周血中的CD4+CD25+CD127lowT细胞明显扩增；在混合淋巴细胞培养中，新鲜分选和扩增后的CD4+CD25+CD127lowT细胞均可抑制CD4+CD25-T细胞增殖。（4）急性髓细胞白血病患者肿瘤负荷组和缓解3年内组外周血中CD4+CD25+Treg细胞均高于健康人组（P<0．05），而缓解3年以上组外周血中CD4+CD25+Treg细胞与健康人组相比，无统计学意义（P>0．05）。结论（1）采用最新的CD4+CD25+CD127low三标记法可以帮助识别CD4+CD25+Treg和部分激活的CD4+T细胞，提高CD4+CD25+Treg细胞的可检出数量，而且不影响细胞活性度，是用来检测和纯化分选CD4+CD25+Treg细胞更理想的指标。（2）老人和老年肿瘤患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞明显升高，新鲜分选和培养扩增后的老年肿瘤患者外周血Treg细胞均具有免疫无能和免疫抑制功能，CD4+CD25+Treg细胞过量累积可能与免疫衰老及老年肿瘤密切相关，利用各种方法去除CD4+CD25+Treg细胞也可能是提高老人机体免疫力和治疗肿瘤的一条新途径。（3）与正常人相比，急性髓细胞白血病患者除缓解3年以上组外，其他各组均存在CD4+CD25+Treg细胞升高现象，提示Treg细胞可能与急性髓细胞白血病发生有关，尤其与3年内容易复发密切相关。
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标签：调节性细胞论文; 免疫衰老论文; 肿瘤论文; 急性髓细胞白血病论文;