成肌细胞与骨髓间充质干细胞移植治疗进行性肌营养不良的实验研究

论文摘要

目的：研究成肌细胞及骨髓间充质干细胞体外培养、扩增、诱导分化；利用成肌细胞及骨髓间充质干细胞经尾静脉注射移植治疗DMD模型鼠mdx小鼠；观察移植后的细胞在宿主体内的生长及融合情况；探讨基因治疗DMD的方法及可行性。方法：用多步酶消化法与差速贴壁法培养C57／BL10小鼠成肌细胞，传代4次后用5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记，取成肌细胞经尾静脉注射移植入mdx小鼠体内，观察成肌细胞在mdx小鼠肌肉组织中的表达。以差速贴壁及密度梯度离心法共同培养C57／BL10小鼠骨髓间充质干细胞，传代3次后，用BrdU标记，以5-氮杂胞苷为诱导剂进行诱导，取诱导分化后的骨髓间充质干细胞经尾静脉注射移植入mdx小鼠体内，观察骨髓间充质干细胞在mdx小鼠肌肉组织中的表达。用1mlDF培养基经尾静脉注射给mdx小鼠设立对照组。结果：多步酶消化与差速贴壁法培养成肌细胞，原代细胞3～4天后即可传代，可获得稳定传代及足量的细胞，能够保证实验的需求。差速贴壁法与密度梯度离心法培养骨髓间充质干细胞，原代细胞7～10天可以传代生长，经诱导的MSCs向成肌细胞方向分化，表达结蛋白。采用一次性游泳力竭实验，经尾静脉注射移植后的mdx小鼠运动能力较对照组明显增强。注射后4周处死实验动物，取双下肢肌肉检测BrdU、desmin、dystropy蛋白的表达，移植细胞与宿主肌肉细胞融合。结论：成肌细胞数量丰富，易于获取，可以通过注射进行大规模细胞移植，可与宿主的肌肉细胞融合形成多核肌细胞，并可以在肌纤维中存活。骨髓间充质干细胞来源广泛、易于体外培养扩增，具有多向分化潜能，是很有前途的细胞工程和基因工程载体细胞之一。经静脉注射移植的细胞能够和宿主体细胞较好的融合，细胞移植治疗DMD在动物体内能够起到一定的治疗作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语表
• 前言
• 第一部分:小鼠成肌细胞与骨髓间充质干细胞体外培养与观察
• 小鼠成肌细胞体外培养与观察
• 小鼠骨髓间充质干细胞体外培养与观察
• 结果
• 第二部分:成肌细胞与骨髓间充质干细胞移植治疗进行性肌营养不良的实验研究
• 1.材料
• 2.实验动物
• 3.方法
• 4.动物饲养及组织取材
• 5.组织学检测
• 6图像采集
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 成肌细胞应用于临床疾病治疗中的现状及前景
• 基因治疗假肥大型肌营养不良
• 致谢