狗肝菜多糖对肝损伤的保护作用及机制研究

狗肝菜多糖对肝损伤的保护作用及机制研究

论文摘要

肝损伤是各型肝病共同的病理基础,其长期存在往往是导致肝纤维化,甚至肝硬化、肝癌发生的重要始动因素。因此防治肝损伤是临床肝病治疗的主要环节之一。肝损伤机制复杂,目前公认与脂质过氧化、免疫功能紊乱、肝细胞异常凋亡有关。狗肝菜[Dicliptera chinensis (L.) Nees.]为民间药食两用的中草药,主要含有多糖、有机酸、氨基酸等物质,民间常用于治疗肝脏疾病。有报道其有效成分多糖对动物模型中CCL4导致化学性肝损伤和卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)所致的免疫性肝损伤具有降低相关血清酶的作用,但未对其保肝作用进行全面评价及作用机制探讨。本研究旨在通过急性重症肝炎模型、免疫肝损伤模型和免疫抑制模型全面系统的评价狗肝菜多糖保肝作用及其免疫调节作用,进一步阐明狗肝菜多糖抗肝损伤的作用机制,为狗肝菜多糖在保肝治疗方面的应用提供实验依据。目的1.研究狗肝菜多糖对D-氨基半乳糖(D-GalN)及脂多糖(LPS)所致大鼠急性重症肝炎的影响及其机制。2.研究狗肝菜多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用及其机制。3.研究狗肝菜多糖对环磷酰胺导致的免疫功能低下小鼠的免疫功能的影响。方法1.采用D-GalN+LPS造模,将wistar大鼠随机分成模型、狗肝菜多糖高、低剂量和正常对照4个组;于6h、12h分别观察并计算各组动物死亡率;存活动物于6h采血检测ALT、AST、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β);12h采血检测血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β和一氧化氮(NO); 12h后全部处死存活动物,HE染色观察肝脏病理形态学变化,免疫组化检测肝组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。2.采用BCG+LPS造模,将昆明种小鼠随机分为正常对照、模型组,狗肝菜多糖高、中、低剂量处理组,联苯双酯处理阳性对照组。观察狗肝菜多糖对小鼠血清ALT, AST活性,肝组织SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和MDA含量;HE染色观察肝组织病理学改变。3. sc环磷酰胺导致免疫低下小鼠模型,将昆明种小鼠随机分为正常对照、模型组,狗肝菜多糖高、中、低剂量处理组,左旋咪唑处理阳性对照组。测定小鼠胸腺、脾脏重量并计算脏器系数,碳粒廓清法测定单核巨噬细胞吞噬功能,比色法测定血清溶血素含量。MTT法测定正常小鼠脾脏淋巴细胞增殖情况。结果1. 6h各组动物均存活;与模型组相比,狗肝菜多糖处理组12h死亡率明显低于模型组。模型组血清ALT、AST活力和TNF-α、IL-1β、NO水平均升高,狗肝菜多糖高、低剂量组血清指标均明显低于模型组。模型肝组织大片坏死、淤血,狗肝菜多糖高、低剂量组组织损伤程度明显降低,以高剂量组效果最佳。狗肝菜多糖高、低剂量组与模型组比较,Bax在肝组织中的表达明显降低,Bcl-2的表达改变不明显。2.与模型组比较,狗肝菜多糖能降低血清AST, ALT活性,降低肝组织MDA含量,增加肝组织SOD, GSH-PX活性,能够减轻肝细胞损伤程度。3.狗肝菜多糖能对抗环磷酰胺引起的小鼠脾萎缩和胸腺萎缩,提高免疫抑制小鼠对碳粒的吞噬作用,而对小鼠血清溶血素的生成有较强的促进作用,能促进小鼠脾脏淋巴细胞的增殖。结论1.狗肝菜多糖能减轻D-GalN/ LPS诱导的肝损伤,可能通过降低炎性介质TNF-α、IL-1β和NO的水平发挥作用,同时抑制肝损伤时的异常凋亡。2.狗肝菜多糖对小鼠免疫性肝损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧自由基、抑制脂质过氧化作用有关。3.狗肝菜多糖能增强免疫抑制小鼠的免疫功能。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 符号说明
  • 前言
  • 第一部分 狗肝菜多糖对 D-氨基半乳糖与脂多糖诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用的实验究
  • 1 材料
  • 1.1 实验动物
  • 1.2 实验试剂
  • 1.3 实验仪器
  • 2 方法
  • 2.1 实验动物分组及处理
  • 2.2 血清 ALT、AST 活力检测
  • 2.3 血清 NO 含量测定
  • 2.4 血清 TNF-α、IL-1β含量测定
  • 2.5 病理形态学改变观察
  • 2.6 统计学处理
  • 3 结果
  • 3.1 狗肝菜多糖对急性重症肝炎大鼠死亡率的影响
  • 3.2 狗肝菜多糖对急性重症肝炎大鼠肝损伤的影响
  • 3.3 狗肝菜多糖对急性重症肝炎大鼠血清炎症介质 TNF-α、IL-1β、NO 水平的影响
  • 3.4 狗肝菜多糖对急性重症肝炎大鼠病理形态学的影响
  • 3.5 狗肝菜多糖对急性重型肝炎肝组织凋亡相关蛋白 Bcl-2 和 Bax 表达的影响
  • 4 讨论
  • 第二部分 狗肝菜多糖对小鼠免疫性肝损伤保护 作用的实验研究
  • 1 材料
  • 1.1 实验动物
  • 1.2 实验试剂
  • 1.3 实验仪器
  • 2 方法
  • 2.1 实验动物分组及处理
  • 2.2 血清生化指标检测
  • 2.3 肝组织生化指标检测
  • 2.4 病理学检查
  • 2.5 统计分析方法
  • 3 结果
  • 3.1 小鼠血清 ALT, AST 活性的影响
  • 3.2 小鼠肝组织 SOD, GSH 和 GSH-PX 含量的影响
  • 3.3 肝组织病理形态学的影响变化
  • 4 讨论
  • 第三部分 狗肝菜多糖对小鼠免疫功能的影响
  • 1 实验材料
  • 1.1 实验动物
  • 1.2 实验药品
  • 1.3 实验试剂
  • 1.4 实验仪器
  • 2 方法
  • 2.1 分组给药与建立免疫低下模型
  • 2.2 单核巨噬细胞吞噬活性的测定
  • 2.3 血清溶血素含量测定及免疫器官指数的测定
  • 2.4 小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验
  • 2.5 统计分析方法
  • 3 结果
  • 3.1 狗肝菜多糖对小鼠廓清指数的影响
  • 3.2 狗肝菜多糖对溶血素及小鼠肝脾指数的影响
  • 3.3 狗肝菜多糖对小鼠肝脾淋巴细胞增殖率的影响
  • 4 讨论
  • 参考文献
  • 结论
  • 综述
  • 综述参考文献
  • 攻读硕士学位期间发表的论文
  • 致谢
  • 广西科技成果查新报告
  • 相关论文文献

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