黄芪对自发性高血压大鼠心肌受磷蛋白和肌浆网钙泵表达影响的初步探讨

论文摘要

前言 黄芪作为“补气”的传统中药,已广泛用于多种心血管疾病的治疗,并有肯定的临床疗效;且有资料表明,黄芪能提高病毒性心肌炎病变心肌的肌浆网钙泵(sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA)活性和其基因的表达,高血压病心肌的SERCA和受磷蛋白（phospholamban,PLB）在蛋白水平的表达明显下降。而心肌功能障碍表现为心肌收缩和舒张的异常,心肌细胞内Ca2+浓度的改变是心肌功能异常细胞病理生理机制的重要物质基础,细胞内钙池Ca2+的释放主要由阿诺碱受体（ryanodine receptor,RyR）和三磷酸肌醇（inositoltrisphosphate,IP3）受体调控,胞浆内游离Ca2+由肌浆网SERCA摄取进入肌浆网内;而PLB是控制SERCA活性的关键性调控蛋白,在去磷酸化情况下它是SERCA活性的抑制蛋白,磷酸化后其对SERCA的抑制解除。目前有关黄芪对高血压影响的研究颇多,对其改善心功能的确切机制,尤其是对SERCA和PLB的影响还报道不多。本研究的目的在于观察自发性高血压大鼠（spontaneouslyhypertensive rats,SHR）高血压早期心肌肌浆网中的SERCA和PLB在蛋白水平表达量的变化,探讨黄芪对SHR心肌PLB和SERCA表达的影响,从而进一步揭示黄芪改善心功能的可能机制。 材料和方法 18只SHR随机分为SHR空白组（n=4）和黄芪组,黄芪组又分为三组,包浙江大学硕士学位论文括低剂量组（n=5）、中剂量组（n=4）以及高剂量组（n=5）,其中低剂量组给予黄茂1.8留0.9ml,中剂量组给予黄茂2.49/l .2ml,高剂量组给予黄茂3.6留1.sml,空白组给予生理盐水0.gml,给药方式为腹腔注射,一天一次。对照大鼠为WKY（Wistar Kyoto,WKY）,共17只,随机分为WKY空白组（n=5）和黄茂组,其中黄茂组包括低剂量组（n=4）、中剂量组（n=4）和高剂量组（n=4）,给药方法同SHR。均于12周龄时正式开始实验,经8周给药后处死大鼠,取去除心房的』心脏在液氮中速冻后,置干冻管于一70℃低温冰箱中保存。取约100mg左右的心肌组织称重以IO0mg/ml的比例加组织裂解液匀浆10一巧分钟,4℃低温离心机中140oor/min离心15分钟,取上清液,以Bradford比色法测定蛋白浓度。再以Westem印迹法测定SERCA和PLB含量,标本加凝胶加样缓冲液后置沸水中变性,按每条泳道20ug蛋白量（SERCA）、Zug蛋白量（P LB）加样,用12%的分离胶及5%的积层胶经SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳,然后以200mA电流转膜90分钟,其后在洗膜缓冲液（T BST）中摇晃1分钟,放入含5%脱脂奶粉的TBST中封闭1小时,再在PLB或SERCA单抗溶液中（1:1000浓度）温育过夜,将纤维滤膜在TBST中洗涤3一4次,每次20一30分钟,后置辣根过氧化物酶标一记的羊抗鼠IgG二抗溶液中（l:500浓度）在摇床上摇晃1小时,然后再用TBST洗涤4次,每次30分钟,以ECL法显色,所得蛋白印迹用EPSON彩色图象扫描仪扫描后再用柯达影像分析系统分析定量。并比较黄茂组与空白组SERCA、PLB的光密度值和PLB/SERCA比之间的差异。结果 1、SHR空白组大鼠的PLB、SERCA含量与wKY空白组大鼠相比有明显的降低（尸<0.01）,但两者的PLB/SERCA比值没有明显差别（P>0.05）。 2、高剂量组SHR大鼠的PLB、SERCA在蛋白水平的表达较SHR空白对照组有明显升高（尸<0.05）,而低剂量组和中剂量组的SHR大鼠与SHR空白对照组之间没有明显改变（P>O.05）,且所有使用黄茂的SHR大鼠PLB/SERCA的比值与SHR空白对照组之间相比无明显改变（乃0.05）。 3、WKY大鼠各剂量组的PLB、SERCA在蛋白水平表达及PLB/SERCA比值与WKY空白对照组相比没有明显的改变（P>0.05）。 2

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 背景
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 研究生期间以第一作者发表、录用的论文
• 致谢